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标题: 荧光定量PCR的样品前处理 [打印本页]

作者: piaoliang110mei 时间: 2009-1-12 11:46 标题: 荧光定量PCR的样品前处理

要通过real-time PCR做细菌的定量，看了很多英文文献，里面在real-time PCR前处理菌液的方法，就是用煮沸法来进行细胞裂解，然后离心，所得沉淀用水溶解后直接用来进行Qpcr，请问大家，这样处理来获得的DNA能保证提取率和结果的正确率吗?

在文章上面绕了很久了，一直没有弄懂这个问题，特来请教大家。

作者: michael_b_rex 时间: 2009-1-14 22:32

楼主看的文献实验目的应该是采用实时荧光PCR的方法定鉴定细菌

(大多数原版宣传资料都把定量PCR仪称为real time PCR system，这是更确切的描述，因为定量PCR仪不仅仅用于定量实验，还有很多其它用途，楼主不要被中文名的“定量”把自己给绕进去了)

这样的文献一般都是用探针法，相对于目前现行的其它细菌检测方法来说探针法real time pcr还是一个快速可靠的选择;

结果只要有扩增曲线就是阳性，可能有时会给一个cut off值;

这样的实验对精准度要求无疑是不高的，因此煮沸处理对实验结果影响不大;

如果楼主仔细看可以发现之前一般都有一个几个小时以上的增菌过程，既然都增菌扩增了，定量检测有意义么?所以煮沸检测方便又不影响实验结果，为什么不用呢

这样的实验会考虑一个灵敏度问题，就是多少cfu是它的检测下限，有的地方叫检出线。

这样的方法很少用于病毒的

作者: yhtfyl 时间: 2023-2-24 07:25 标题: 感谢楼主分享，受教了

感谢楼主分享，受教了

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