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标题: [求助]THP-1悬浮细胞培养 [打印本页]

作者: wu11998866 时间: 2012-2-10 17:22 标题: [求助]THP-1悬浮细胞培养

实验才进行了几个月，发现本来养好了的细胞又开始不好了，我养的是THP-1悬浮细胞，以前是隔三天就吸出3分之1的液体，换上同样量的培养基（培养基和血清已混合），三天就可以传代了，可是现在5天都不敢传代，细胞根本就不怎么长，培养基颜色也没有变黄，有的人说悬浮细胞要定期离心，我之前也试过，每次离心之后，细胞就会变形，长得非常难看，所以我一直就不离心，前几天因为实验的要求，我想给细胞更换新的培养基，于是就决定再试着离心一次，可是自从离心之后细胞就开始不好，里面的碎片也有不少，THP-1悬浮细胞究竟有没有必要离心传代？如果传代是否需要吹打均匀？因为我传代时不怎么吹打的，但是现在看细胞就有成团的现象。不知道有没有哪位大虾能够指点迷径阿？

作者: mickeylin 时间: 2012-2-10 17:22

如果细胞活性好，2～3天肯定可以传代。细胞培养基一旦偏酸，要及时传代，否则很快贴壁，就很难再恢复原先的活性了。

作者: 彼岸花opp 时间: 2012-2-10 17:23

这个细胞离心可以吧,转速不要太大!应该吹散吧!是不是培养液太久了!

作者: vvmmoy 时间: 2012-2-10 17:23

同意二楼群友的说法，THP-1适宜在偏碱性环境（PH7.5左右)生长，对数生长期基本上24小时翻倍。不要等变黄，培养液偏酸就不好了。实在碎片多了还是可以离心的，1000转3分钟就可以，不多的话，可以在培养箱中把培养瓶站立放置半小时，让细胞沉淀在底部，吸去上层液体，更换培养液。贴壁不多可以轻轻吹打。多的话就更换培养瓶，另外注意，培养瓶要用塑料的，千万别用玻璃瓶，不然贴壁很厉害

作者: wu11998866 时间: 2012-2-10 17:24

谢谢大家，to l2001iu:你的THP-1怎么不是均匀分布的，你照片里好像是一团o哦。
不是塑料瓶更容易使细胞贴壁吗？原来THP-1适宜在碱性环境中生长阿，我一直以为偏酸性环境对细胞生长好一些。明天给它换液，采用你们提供的方法，还是要离心，今天我去看了一下，真的很难看哦，好多碴碴。

作者: hot_hot_hot 时间: 2012-2-10 17:25

THP-1属单核细胞系，有单核细胞粘附玻璃的特性。

作者: wu11998866 时间: 2012-2-10 17:25

谢谢，那我明天换一下培养瓶。可是我就担心我的细胞是不是能够恢复活性阿

作者: 04906 时间: 2012-2-10 17:25

均匀分布或是是一团，是与细胞状态有关的，我的经验是状态好，细胞密度不高时会抱团，呈现莹亮的葡萄串状，证明它在生长。

作者: zhezhe 时间: 2012-2-10 17:26

但是我感觉我的ＴＨＰ－１基本是偏酸性时长的更好。

作者: one 时间: 2012-2-10 17:26

THP-1悬浮细胞必须应用进口胎牛血清培养，细胞确实是抱团生长，体积很小。另外你的细胞可以冻融一次，可能细胞状态会恢复

作者: 缘yuan 时间: 2012-2-10 17:26

必须进口胎牛？我用的是国产小牛，长的很好

作者: 3648755 时间: 2012-2-10 17:27

还有个可能性是楼主可能传代太多了

细胞代数过多，活性也会大打折扣的

作者: fei1226com 时间: 2012-2-10 17:27

我是用进口胎牛血清，并添加谷氨酰胺，细胞疯长

作者: SN0905 时间: 2023-12-22 13:35 标题: 没有求助权限想借楼蹲一个回复

我想在悬浮培养第1,2,3天分别收集悬浮细胞做WB，这期间是不是需要换个液呢？悬浮细胞铺在6孔板里了该怎么换液哇？

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