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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

hold住[使用道具]
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发表于 2012-8-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #100 eric930 的帖子

既然是从Sigma买的，那到Sigma公司的网站上肯定能查到。
看看下面链接中的TABLE 1，里面有你要的。
[iframe]http://www.sigmaaldrich.com/sigma/product%20information%20sheet/l4129pis.pdf[/iframe]
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newway[使用道具]
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发表于 2012-8-30 17:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好！有哪位高手能指点一下，我的实验需要用到HSC－T6，我想知道它的生物学性状，它本身有没有cox－2基因的表达，量多吗能否测到，还有如果要做RT－PCR扩增cox－2的哪一断比较好，我察了很多资料就是没有找到答案，马上就要准备买材料了，我还没有弄清楚，真着急，希望大家帮帮忙，感谢！盼复
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2012-8-30 17:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

它本身有没有cox－2基因的表达，量多吗能否测到？

看看下面这篇文章：
cuturl('http://www.jbc.org/cgi/content/full/275/26/20136')

如果要做RT－PCR扩增cox－2的哪一断比较好？

可参考下面的文章：
cuturl('http://jpet.aspetjournals.org/cgi/content/full/303/3/1248')
cuturl('http://www.jneuroinflammation.com/content/2/1/4#B22')
cuturl('http://www.jpgn.org/pt/re/jpgn/fulltext.00005176-200108000-00013.htm');jsessionid=DZTi1QKK6ucDinYM2K39BGM44MEhhTxRE8zrmaB97g12jcl4eIdK!1389088241!-949856145!9001!-1
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发表于 2012-8-30 17:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教高手：
1. 大鼠肺微血管内皮细胞原代培养选择哪种培养基为好？
2. 文献资料显示大多选用DMEM培养基，那么该选用哪个公司的产品？是低糖还是高糖？除了L-谷氨酰胺和丙酮酸钠，是否还要加入HEPES和肝素？
3. 胎牛血清是在培养基过滤前加入好，还是培养基过滤后加入好？如果是在培养基过滤后加入，是否会使已调好的培养基PH值发生改变？
谢谢！
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831226[使用道具]
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发表于 2012-8-30 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

1.一般为DMEM
2.使用较多的是GIBCO的高糖型，DMEM的配制（添加3.7克NAHCO3，20mmol/L
HEPES,肝素钠100mg/L,青霉素100U/ml,链霉素100ug/ml).PH调至7.2-7.4 ，过滤分装4度保存。
3.一般在过滤前加血清。
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发表于 2012-8-30 17:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我是做生殖免疫的，需要对小鼠的子宫内膜细胞进行培养，而这方面的资料很少，希望大家慷慨解囊，告知具体步骤，主要是细胞的采集，以及鉴定。
先谢谢大家。
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发表于 2012-8-30 17:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

小鼠子宫内膜细胞的培养和处理：

取受精后第4 d 的孕子宫,纵向剖开,用手术刀片小心刮取子宫内膜, 而后用0.5 %胰酶-0.2 %EDTA ,37 ℃消化30 min ,制成细胞混悬液,将细胞加入放有盖玻片的24 孔板(预先用0.1 %多聚赖氨酸处理24 h) ,每孔细胞浓度为2～3 ×105/ 孔。培养基为1∶1 F12/ DMEM含有10 %胎牛血清,培养24 h 后换液, 以后隔天换液。
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-8-30 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
研究脑缺血后损伤修复的问题
以前一直养原代, 现在想换成N2a细胞, 想问问关于这个细胞系的详细情况,
比如, N2a细胞表面的受体
能否用于研究能量代谢方面的问题
能否利用外源性的一些物质,比如丙酮酸,乳酸等

N2A细胞是单纯的神经元细胞系,还是也有胶质细胞,这个问题我也没有搞清楚
还请研究过这个细胞系的大侠们给予指点,非常非常感谢!!
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发表于 2012-8-30 17:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

关于N2a细胞方面我已经发过不少帖子，也提供了培养方法，具体请见：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=4171148&sty=3')
N2a细胞全称mouse neuroblastoma N2a cells，也有人称其为Neuro-2a，是小鼠来源神经瘤母细胞。我们目前主要是以该细胞作为AD研究的细胞模型，这部分试验是与The Burnham Institute, La Jolla, California, USA共同合作进行的。即将有主体工作在国内的paper发表。
据我所知，该细胞是来源于单纯的神经元细胞，而非胶质细胞。对于外源性一些东西对该细胞的影响是可以研究的，且已有研究报道，比如说RA（视黄醛酸），cAMP等对其分化的影响。
但是，对于该细胞表面受体和能否用于研究能量代谢方面的问题，恕在下不敢妄言。在此提供一篇文献，你可以参考一下。
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发表于 2012-8-30 17:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #109 viviwang1987 的帖子

但有些细节方面的问题想与你探讨一下
1 有战友说N2a不是单纯的神经元细胞，而是一个杂细胞，含有神经元，胶质细胞和星性胶质细胞等，但可以肯定的一点是，它不是单纯的胶质细胞。这对于我们的研究就ok了。
2 一个比较有意思的问题是，这个细胞在培养到第3天，给它换过液，到第4天的时候，开始长出很多的突触，和你拍的照片一样，这是不是提示，如果该细胞用于做实验的话，应该至少培养至第4天，等它具有比较健全的功能的时候再使用呢？
3 其实是想找一些具体的文献来支持我用这个细胞，但其实，很多的东西都是创新的，所以找不到类似的文献，其实，要是别人用这个细胞做了我想要做的方面，那么我也就没什么可做了。
4 关于它的培养基，OPTI－MEM实在是太贵了，所以，想要寻找一种可以取代的培养基，不知道你们有没有试过其他的，比如自己加全氨基酸的DMEM培养基，我正在试，可以互相交流：）
5 关于它的表面受体and transporter 我已经找到相关文献，可做为依据支持我的实验。
在次感谢你的详细解答以及你提供的文献，希望就为数不多的N2A细胞，能多多交流：）
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