小中大鸡胚肝细胞的制备：
将鸡胚用70 %酒精浸泡进行表面消毒,在超净工作台中打开蛋壳,无菌取出鸡胚的肝脏。放入盛有少量生长液的器皿中。剪碎肝脏,并用PBS 洗涤除去血细胞。将剪碎的肝脏移入血清瓶中,按每胚10mL左右加入5 %胰酶,37 ℃水浴3 —4min 进行消化,第一次消化的溶液应弃掉。将消化好的溶液放入加有少量生长液和20 %牛血清的容器中终止胰酶消化,并冰浴。重复消化过程,直到胰酶中的肝脏完全消化,只剩下粘稠的—些结缔组织。将冰浴中的溶液取出,分别用400 目和500目的细胞筛过滤。将过滤好的溶液进行1000rPmin , 10min 离心,除去胰酶。将沉淀下来的细胞用10mL 生长液悬浮,并取出011mL 稀释4 —10 倍,用Typan 蓝染色,用血球记数板在显微镜下计数。配成每毫升1 ×106 细胞悬浮,接种到细胞瓶中。37 ℃,5 %CO2 培养3d 后可长成单层。
