细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [总结帖]细胞版疑难帖

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[总结帖]细胞版疑难帖

viviwang1987[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77490
精华 0
积分 458
帖子 636
信誉分 100
可用分 3953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
141
 

正如楼主所言,培养大鼠背根神经节细胞确实很多人倾向于用胚胎鼠,主要原因是其更容易养活。但是也可以用新生大鼠的。另外也有很多人采用鸡胚,相对更容易操作,你可以查查看,相关文献不少。主要是看自己的试验平台如何,采用哪种更方便。

这里给提供出新生大鼠背根神经节神经细胞的分离和培养步骤,供参考:

取新生1 周的SD大鼠4 只, 无菌条件下取出背根神经节, 0. 25%的胰蛋白酶、0. 03%胶原酶消化法分散细胞, 加牛血清蛋白终止消化后, 以1 000 转/分离心5 分钟, 弃上清液, 沉淀加无血清PRM I21640 培养基后, 置于60mm 培养皿中60 分钟(37℃, 5% CO 2 的培养箱内) , 吸取未粘附部分, 细胞计数并调整细胞浓度至4 万个/m l。37℃ 5% CO 2 温箱内正常培养。
顶部
49888[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77494
精华 0
积分 776
帖子 1211
信誉分 100
可用分 6906
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
142
 

消化时间?--大致的
顶部
viviwang1987[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77490
精华 0
积分 458
帖子 636
信誉分 100
可用分 3953
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
143
 

消化时间一般37℃ 15~30 min。主要看经验,与组织多少及酶液体积大小都有关系。
顶部
3648755[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77481
精华 0
积分 574
帖子 767
信誉分 100
可用分 4731
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
144
 

因为我们实验室简陋,没有解剖显微镜,请问在取材时,如何才能准确
找到呢?在肉眼下?
顶部
3648755[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77481
精华 0
积分 574
帖子 767
信誉分 100
可用分 4731
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
145
 

请问培养这种细胞应用什么培养基?
用1周的新生鼠细胞的得率会不会低?
培养时不用包被底物吗?
顶部
toy[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77357
精华 0
积分 716
帖子 1052
信誉分 100
可用分 6165
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
146
 


1)  用手术刀片刮去最表层软骨,削下软骨组织片,收集在PBS液体中,反复清洗除去软骨片表面的血液及误带的其他组织。
2)  将软骨组织片充分剪成1mm3以下的组织块,用PBS液清洗2次。
3)  软骨组织以0.25%胰酶在37℃水浴中轻微振荡消化1小时,PBS液清洗2次,然后加入0.3%原酶消化12小时,至软骨组织块基本消失,溶液变混浊。
4)  以1500r/min离心10min。收集细胞
5)  加入PBS清洗细胞。
6)  在细胞团中加入培养液体制成细胞混悬液,用200目铜网过滤,收集过滤液。
7)  计数细胞,调节细胞密度为1×105个/ml的 密度接种。
细胞接种:
1)  多聚赖氨酸包被培养瓶
l  PBS稀释多聚赖氨酸成0.05mg/ml,湿润培养瓶生长面,37℃下静置4小时。
l  倾去赖氨酸,以消毒3蒸水洗涤器皿数次。
l  接种细胞前,用培养液洗涤器皿一次。
2)打开培养瓶盖,用吸管吸取一定量的细胞悬液,加到培养瓶中。
3)直接加盖封口,在培养箱中培养4小时。
4)待细胞黏附牢靠后再补加足量的培养液(培养液液面高度2-5mm)养液中含有10%胎牛血清、青霉素100u/ml,链霉素100ug/ml,两性霉素B2.5ug/ml,谷氨酰氨2mmmol/L,1%维生素添加剂和维生素C50ug/ml, 放入37℃,5%CO2孵箱。每隔2-3d更换培养液。!
顶部
vera+[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76438
精华 0
积分 506
帖子 711
信誉分 100
可用分 4361
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-5
状态 离线
147
 

我已经养了9批人骨关节炎软骨细胞了,发现你的这个漏洞很多,我先来补几个。
1.PBS中应含有双抗液,浸泡超过10分钟。
2.胰酶消化后要用血清中和,这样才不会在以后的消化过程中损伤细胞。
3.要先过滤再收集细胞.
4.需要包被吗?!用进口的塑料瓶就行了。
顶部
KGZ564[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74472
精华 0
积分 452
帖子 583
信誉分 100
可用分 3756
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
148
 

我购买了SIGMA的5-AZA,说明书说该药在水中不稳定,我要用于细胞培养时的药物干预,24小时和72小时,我该如何配置该药,以及操作时如何保持药物溶液无菌,是否可以进行过滤,还有就是该药是否可以事先配置分装,请问其储存条件,谢谢 springpcy@yahoo.com.cn
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
149
 

你可以配成50mg/ml的浓度溶解在DMSO里或者0.25mg/ml溶解在水溶液里。最好是前者,这样stock 浓度大,做实验加药方便。不需要过滤,因为DMSO会溶解常用的滤膜,不用担心菌污染,没有什么细菌能在DMSO里生长,配制的时候在超净台里配制就可以了。这个东西不是很稳定,最好现用现配,用之前几个小时配,配好后放在冰上。如果实在要配储存液,最好分装储存在-80度。但不宜配制过多,一个月之内用完比较好。
顶部
轰轰[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75630
精华 0
积分 235
帖子 209
信誉分 100
可用分 1866
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-26
状态 离线
150
 

我是做生殖免疫的,需要对小鼠的子宫内膜细胞进行培养,而这方面的资料很少,希望大家慷慨解囊,告知具体步骤,主要是细胞的采集,以及鉴定。
先谢谢大家。
顶部