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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

is2011[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:17 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

小鼠子宫内膜细胞的培养和处理：

取受精后第4 d 的孕子宫,纵向剖开,用手术刀片小心刮取子宫内膜, 而后用0.5 %胰酶-0.2 %EDTA ,37 ℃消化30 min ,制成细胞混悬液,将细胞加入放有盖玻片的24 孔板(预先用0.1 %多聚赖氨酸处理24 h) ,每孔细胞浓度为2～3 ×105/ 孔。培养基为1∶1 F12/ DMEM含有10 %胎牛血清,培养24 h 后换液, 以后隔天换液。
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whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

在相关文献上看到过某种培养盒，可以调节盒内氧、二氧化碳和氮气浓度，然后放入一般培养箱培养的，小弟现制作细胞的缺氧模型，急需这个培养盒，可不知道哪里有，具体名称叫什么，有哪位达人知道能告诉一下吗？不胜感谢！
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kuaizige[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

不知道你是否已经找到.长沙长锦科技有限公司有这种的.
产品名就叫培养盒,有两种规格.Ⅰ型: 1300 ml,价格:100,Ⅱ型: 2300 ml价格:120.密封的培养盒可充装任何混配气，再装入普通培养箱内，相当于一个“微型培养箱”。可耐120℃ 温度消毒。
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发表于 2012-8-30 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

多谢啊，我准备了梅里埃公司的厌氧培养盒，不过你提供的东西却是是最符合我需要的，我会长沙联系的，多谢多谢！
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831226[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请教各位:我要培养眼角膜上皮细胞及基质细胞，初次接触，不知该怎么准备，如何培养，应该注意些什么问题，希望了解的详细一些，谢谢各位。
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cocacola[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我培养了兔角膜基质细胞，不知对你能否有帮助，具体方法如下：
1、原代培养
采用新西兰白色家兔，雌雄不限。兔采用耳缘静脉注入空气处死。0.5%庆大霉素冲洗结膜囊，无菌条件下摘出眼球，PBS液冲洗2-3遍后放入双抗溶液(青霉素10万单位/L，链霉素10万单位/L)中浸泡30~45 min。在超净工作台内用眼科剪沿角膜缘取下完整角膜（一定不能含有角巩膜缘），PBS液冲洗2遍，体式显微镜下撕掉上皮层、前基质层、后弹力层及内皮层。将剩下的基质层剪碎成1mm×1mm大小的组织片，接种于预先用胎牛血清处理的玻璃培养瓶中，加入少量培养基使液体刚好浸没组织块周围而不浸没组织块表面,以确保组织块不滑动或漂浮。然后将培养瓶置于5％CO2、37℃饱和湿度恒温孵箱内培养。于第二天再添加培养基约2ml,以后每周换液两次。约7~10天可见角膜基质细胞从组织块边缘爬出，此时将角膜组织块转移到具有相同条件的另外的培养瓶中，继续培养1周即可见角膜基质细胞组织块边缘爬出。这样反复转移可重复3~4次，然后将角膜组织块丢弃。
2、传代培养
原代培养的细胞在显微镜下观察发现角膜基质细胞生长至大部分（约80%）汇合时，小心倒掉培养液，PBS液缓慢冲洗培养瓶两遍。然后加入0.1%胰蛋白酶消化，在显微镜下观察贴壁生长的细胞回缩变圆，迅速加入适量DMEM（含胎牛血清）终止消化，反复吹打，使细胞悬浮，离心，弃上清，制成细胞悬液，以血球计数板计数细胞，调整细胞密度为1×105个/ml，接种于培养瓶（每瓶约2～3ml）继续培养，每3～4天更换1次培养液，一般约7天长满融合，可按上述方法再进行传代。实验所用细胞为传1~2代细胞。
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发表于 2012-8-30 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想楼上的战友肯定有许多关于角膜基质细胞或角膜干细胞培养的资料吧！能否不吝传给我一些（主要是国外的），行吗？在此先谢过！
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发表于 2012-8-30 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我刚做辣椒细胞培养，不知用多大的孔径过滤？请指教
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发表于 2012-8-30 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
不同的植物细胞的大小差异较大,直径一般为20-100μm,也有更大的,如西红柿、西瓜的果肉细胞，可达1mm.辣椒细胞应该在20-100μm范围之内,你可以测一下直径.再参考下面这个表来确定所用孔径大小.
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fklo83[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
【求助】是何污染？有何对策？急!!!!

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是你的焦距不清楚还是什么原因，我看不清那些黑点。但告诉你一个让你高兴的消息，如果你怎么也调不清楚这些黑点的焦距，而且培养液没有变黄，没有浑浊，那么污染的可能不是你的细胞，而是你的显微镜——镜片之间可能有脏东西，如果换个物镜黑点消失，可能是在物镜上。

我的一台倒置显微镜也有同样的问题，有一个物镜下看到的景象和你照片上的一样：）

不知说的对错，希望能抛砖引玉。
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