细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [总结帖]细胞版疑难帖

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 369  17/37 |‹‹‹15161718192021222324›››|
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:[总结帖]细胞版疑难帖

HPLC使者[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 76541
精华 0
积分 250
帖子 260
信誉分 100
可用分 2011
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-7
状态 离线
161

发表于 2012-8-30 18:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
本人打算用流式细胞仪检测肝癌细胞的端粒长度，我现在正做动物实验，模型已经做出。因流式细胞检测要求检测对象必须是单细胞悬液，因此我想请教有哪些方法可以实现实体组织向单细胞悬液的转换，转换的过程中都有哪些需要注意的事项？
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
162

发表于 2012-8-30 18:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

如果你是要得到单细胞悬液的话，也就是说你要从组织块中得到细胞的话，你可以用酶消化法（胰酶、纤维蛋白酶）将组织块消化后离心2000g/15min，还可以用机械法，将组织用眼科剪和7号尖刀剪切成小碎片，然后过滤网由粗到细第三种方法就是将剂两种方法结合起来。酶消化法容易破坏细胞的表面标志而机械法容易损伤细胞。具体的你可以看一下司徒镇南编著的细胞培养
顶部
66小飞侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75376
精华 0
积分 466
帖子 651
信誉分 100
可用分 4008
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
163

发表于 2012-8-30 18:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要做一个实验，需要检测样品血液中肝癌细胞含量：大致看了文献里的几种检测方法，Papanicolaou or Giemsa stains、台盼蓝染色（Typan blue exclusion method）、流式细胞仪（Flow Cytometer）、AFP mRNA RT-PCR等，刚刚开始接触这个，不是很懂，希望大侠们帮忙分析分析，哪些方法好呢？多谢拉
顶部
33号[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74277
精华 0
积分 549
帖子 757
信誉分 100
可用分 4611
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-9
状态 离线
164

发表于 2012-8-30 18:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
台盼蓝染色是作为细胞活力的检测它有特异性吗?流式细胞仪（Flow Cytometer)可以检测，你需要有特异的标记使用流式细胞仪你可以做一个细胞的检测如果你的机器很好的话还可以在计数的同时进行分选从而进行下一步操作；另外，你可以用免疫分选磁珠，这需要有磁性分选器和免疫分选磁珠，它能过分离得到你想要的细胞你可以计数或者上流式进行检测，但是价钱不菲你可以询问一下dynal公司。
顶部
66小飞侠[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75376
精华 0
积分 466
帖子 651
信誉分 100
可用分 4008
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-22
状态 离线
165

发表于 2012-8-30 18:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢！我现在准备先提取单个核细胞，然后做AFP mRNA RTPCR,做做看。
顶部
mimili_901[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73543
精华 0
积分 564
帖子 723
信誉分 102
可用分 4458
专家分 20
阅读权限 255
注册 2011-9-24
状态 离线
166

发表于 2012-8-30 18:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我一直在体外培养淋巴细胞，培养18～24h后，最好的时候其成活率也就是20～30％左右，因为后面要做RT-PCR扩增IL2，可细胞一直培养不好，我想可不可以在体内刺激，比如在鸡体内用新城疫疫苗免疫后，从2h～72h 采血后分离淋巴细胞，直接抽mRNA，然后做RT-PCR，不知道有人这样做过吗？这种方法可行吗？请各位指点！谢谢！
顶部
junhun[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77185
精华 0
积分 561
帖子 781
信誉分 100
可用分 4746
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-14
状态 离线
167

发表于 2012-8-30 18:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是人的嘛？如果是的话你要的是B还是别的？是B淋巴细胞的话你可以试试：
一、检查一下你的培养基PH，换一下培养基，可以用液体的或者不含血清的，有专门的淋巴细胞培养液。如果你没有分离的话因为B能过作为APC进行抗原提呈可能会作为靶细胞被CTL杀死。
二、试一下分离磁珠对你想要的细胞进行纯化。
三、加入淋巴细胞增殖刺激剂如植物血凝素、刀豆蛋白和单克隆抗体等效果会好一些；
四、用小瓶或者孔板（24、12孔等）培养扩增效果还可以
希望对你有用！
顶部
911[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73229
精华 1
积分 523
帖子 682
信誉分 102
可用分 4276
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
168

发表于 2012-8-30 18:35 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有哪位高手知道关于干7AAD的具体知识，怎样才能买到
顶部
ffooll[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 73418
精华 0
积分 437
帖子 574
信誉分 100
可用分 3666
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-22
状态 离线
169

发表于 2012-8-30 18:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

7-Amino-actinomycin D (7-AAD),7-氨基放线菌素D，是一种核酸染料，在流式细胞术中用于鉴定死细胞，这种作用与PI相似。但它较PI有一定优点，就是PI检测时同时占据FL-2和FL-3两个通道，如果要进行比较复杂的多色分析时不太方便，而7-AAD只占FL-3通道，这样在像FACSCalibur这样的仪器上还可以同时使用另外三种荧光标记。

很多公司有卖，比如BD，eBioscience等，找它们的代理商就行了。
顶部
moonlight45[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79769
精华 0
积分 487
帖子 654
信誉分 100
可用分 4096
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-15
状态 离线
170

发表于 2012-8-30 18:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问使用的是组织直接培养还是酶消化培养？是什么酶，消化时间大概是多少？培养基的血清浓度是25％还是10％？谢谢！
顶部
 369  17/37 |‹‹‹15161718192021222324›››|