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据我所知，目前国内做这方面研究的还不多。第三军医大学附属西南医院耳鼻咽喉科张学渊组是目前国内做的较多的了。
他们采用的是组织块培养法进行体外培养。
具体方法是：
豚鼠耳蜗血管纹组织块的分离与培养：
选取重约300 g 的封闭群豚鼠10 只,雌雄兼有,均耳廓反射灵敏,耳镜检查正常。以1 %戊巴比妥纳(40 mg/ kg) 腹腔注射麻醉,断头,迅速取出双侧听泡,用75 %酒精浸泡2 min ,无菌等渗盐水冲洗后浸入D2Hanks 液中。解剖显微镜下剪去听泡骨壁,钩破蜗尖,自顶回至基底回完整剥离出耳蜗外侧壁软组织带,并仔细分离出含深色色素的血管纹,将血管纹组织块切碎,均匀平铺于两个35 mm 的培养皿底(事先加有鼠尾胶原) ,静置30 min ,向培养皿中加入含有25 %胎牛血清(Hyclone) 的DMEM培养液( Hyclone , 另加L2谷氨酰胺0. 9 g/ L , Hepes 20mmol/ L ,青霉素100 U/ ml ,链霉素100μg/ ml) ,置5 % CO2 ,37 ℃培养箱中培养 。有细胞生长后,每3 d 更换约1/ 2 的培养液,10 d 后进行首次传代:吸掉全部培养液,用D2Hanks 液冲洗培养皿3 次,用0. 25 %胰蛋白酶(含0. 01 % EDTA) 消化液消化,常温下约5 min 大部分细胞开始脱壁,中止消化,取出组织块,将细胞悬液离心,弃去上清液后加培养液,台盼蓝染色并计数,细胞成活率约90 %。将未染色的细胞悬液接种于培养瓶中继续培养,细胞密度为(2～3) ×105/ ml 。
培养细胞纯化：
在细胞传代时,当加入消化液后,显微镜下只要观察到约3/ 4 的细胞回缩近圆形时即中止消化(经需5 min) ,轻轻吹打后将细胞悬液种入空白培养瓶,而脱壁慢的1/ 4 的细胞则弃掉,即每次传代只保留脱壁较快的约3/ 4 的培养细胞,当细胞悬液接种后,当观察到约3/ 4 的细胞贴壁后(约18 min) ,即吸掉培养
瓶中的培养液,连同尚未贴壁的1/ 4 的细胞一起弃掉,重新加入培养液置CO2 孵箱中培养。传代后12 h ,培养细胞已完全伸展,在倒置显微镜下刮去已贴壁的可疑杂细胞。上述操作在前三代细胞传代时连续进行。
