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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

XYZQ[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位老师、同学们：
您们好！ 我是北京某医院的一名临床型的研究生，想测定血小板中内皮型一氧化氮合酶（eNOS)和诱导型一氧化氮合酶（iNOS)的活性，国内外的文献中均利用同位素3H (氚)来标记底物L-精氨酸，最后通过液闪仪测定中间产物3H-L-胍氨酸的量来反映酶的活性。 在此实验中需要用到同位素、液闪仪、10000转/分以上的低温高速离心机， 而我们医院实验室没有液闪仪，而且也不能使用 3H, 故试验无法进行。目前也有测上述两种酶的试剂盒，但都是测定血清和组织中的酶活性的，据本人片面了解还没有直接测定血小板中这两种酶活性的。 目前我正面临毕业，因此十分着急， 特向各位老师同学们求助，看哪里具备上述实验条件,并允许外单位人员进行试验，或者能直接帮我测定更好，有能测定血小板中此两种酶活性的试剂盒也可， 价钱可以商定， 真诚期待您们的答复。
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junjie05[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
可以提取处理后细胞的胞浆蛋白，用Western Blot检查NOS的活性
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junhun[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Western检测的不是活性吧？
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any333[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


我养的PC12细胞用来做分化前和分化后加入同种物质的比较实验，可每次买过来的细胞养不了多长时间原来是圆形的就长突了，使得分化前后形状不是太明显，请问怎样才能使不该分化的细胞维持圆形。谢谢！
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2012-8-30 18:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PC12细胞本来就容易分化,需要养一段时间就换新的一批.所以买回来新的细胞传代后可以先冻存一部分,这样的话当细胞开始分化时还可以用原来冻的细胞.其实养细胞也没有什么,用15%的小牛血清,1640培养基就可以做到.
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发表于 2012-8-30 18:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

你要用马血清，牛血清会促进分化，而马血清会封闭牛血清作用的位点，从而保持细胞的未分化的状态。我用的是DMEM,10%HS,5%FBS。
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发表于 2012-8-30 18:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

要用马血清养才可以
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发表于 2012-8-30 18:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

PC12细胞培养：10%HS,5%FBS，1640培养基（DMEM也可以，但是长的比较快）
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发表于 2012-8-30 18:55 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我养的胰岛细胞用RPMI1640培养5天后做葡萄糖刺激试验,低糖高糖刺激无结果.考虑是培养基含糖长期刺激胰岛细胞,细胞内胰岛素颗粒耗竭的原因.请问谁养过胰岛细胞,作过刺激试验,指导一下.谢谢
我养的是新生猪胰岛细胞,用RPMI1640培养5天后用PBS洗涤细胞三次后,分成两组,分别用含低糖2.7mmol/L,高糖16.7mmol/L的D-HANKS液培养4小时后收集上清液测胰岛素,结果低糖高糖刺激结果无差别.
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 小中大

我没有做过，但是我听说有无糖的培养基，我觉得你是不是可以先用无糖培养基培养，做实验的时候，换成不同糖浓度的培养基刺激。
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