[总结帖]细胞版疑难帖 - 经验共享

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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

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271

发表于 2012-8-31 12:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #271 shenkunjie 的帖子

分离后进行除菌？
好像很难，最多只是抑菌而已。

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272

发表于 2012-8-31 12:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

你可以使用percoll，是pharmacia公司生产的用于心肌细胞的分离纯化，价格大概360元/100ml 可以用10－20次，一般心肌细胞使用40％、60％两个剃度分离，2500rpm*30min纯化效果不错，但是有一个问题就是细胞容易丢失。

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273

发表于 2012-8-31 12:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我想做一个基因在子宫内膜中的表达调节，我看有人用hela细胞做实验的时候说是子宫内膜细胞，我也想用。但我有点糊涂，子宫颈癌细胞和子宫内膜细胞有什么关系。请各位大虾帮忙，在下万分感激。

___________________________________________________________________________________________________________

关系大了，子宫内膜细胞分上皮和基质细胞两类，你到底想在哪里转基因啊？？？

hela细胞和子宫内膜细胞还是不一样的你可以用他来做些前期的预实验，但如果要说明问题最好还是用子宫内膜细胞。好象香港大学有子宫上皮细胞来源的细胞系。

实在不行你就自己分离培养

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274

发表于 2012-8-31 12:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

要做3T3细胞细胞生长曲线，开始种多少细胞？可以数6－7天啊

——————————————————————————————————————

抱着学习讨论的目的，
NIH3T3细胞体积形态比较大，如果考虑铺6－7天，3000－5000细胞即可，

BUK[使用道具]
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275

发表于 2012-8-31 12:43 资料个人空间短消息加为好友

小中大

培养瓶？面积？
多孔板？

gemei0115[使用道具]
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276

发表于 2012-8-31 12:44 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可以用24孔板，每孔加3000－5000个细胞，或者用6孔板，一般用104个数量级。仅供参考！

orangecake[使用道具]
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277

发表于 2012-8-31 12:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

做生长曲线一般用MTT，96孔板，3000－5000细胞/孔
我不知道zfcingba铺24孔或者6孔是不是考虑用细胞计数，还是用什么别的方法？另外24孔板铺3000个细胞，明显比较少，

pencil菲[使用道具]
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278

发表于 2012-8-31 12:45 资料个人空间短消息加为好友

小中大

位战友
本人目前实验设计存在问题，请大家出手相助啊！
实验名称：生长抑素类似物善龙（sandostatin lar)对ＭＭＣＨ－９７（人潜在高能转移肝癌细胞株）作用的体外实验研究（目前国内没有见相关报道）
本人已经培养了ＭＭＣＨ－９７细胞
１＼拟做ＭＴＴ测细胞抑制率
拟分四组：空白对照＼善龙＼善龙＋５－ＦＵ\５－ＦＵ
但是本人没有查到９６孔板需要的细胞密度及加药浓度（善龙浓度），浓度太大可能所有组细胞都死亡．
２＼拟做细胞流式仪测凋亡
拟分四个样本
但不知瓶中细胞要求密度及所加药物浓度（善龙及５－ＦＵ的量，加药后需要培养多长时间？）
３＼拟做免疫组化，了解凋亡原因
目前在生长抑素类似物奥曲肽的研究中已经有资料证明其可以促进肿瘤细胞凋亡，我选择Fas/Fasl指标可以吗？
我是ＭＤ研究生，说句实话对实验没有什么兴趣，但是老板催的紧，有这方面经验的战友，或者可以查到相关外文文献的请发给我，本人愿意分相谢
谢谢了！

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发表于 2012-8-31 12:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

QUOTE:

原帖由 pencil菲 于 2012-8-31 12:45 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
位战友
本人目前实验设计存在问题，请大家出手相助啊！
实验名称：生长抑素类似物善龙（sandostatin lar)对ＭＭＣＨ－９７（人潜在高能转移肝癌细胞株）作用的体外实验研究（目前国内没有见相关报道）
本人已经培养了ＭＭＣＨ－９７细胞
１＼拟做ＭＴＴ测细胞抑制率
拟分四 ...

我对你这个药物也不是很了解，但我觉得你既然要考虑它对你细胞的作用，那么你就得自己去试验，试不同时间，不同浓度，如果国外做了，那只能对你提供参考，因为你们彼此的药物，细胞都不一样，不存在可比性。
几点建议：
1、你可以将药物浓度放到临床血药浓度，然后取浓度梯度降低，试出大致浓度，然后可以取精确浓度，做药物抑制试验的文献很多了，MTT，平板克隆都行。
2、把浓度、作用时间试出来以后，可以做流式，跑DNA ladder，TUNEl染色，电镜等形态学指标
3、目前在生长抑素类似物奥曲肽的研究中已经有资料证明其可以促进肿瘤细胞凋亡，别人的结果提示凋亡是什么途径？凋亡途径主要有细胞内线粒体途径和细胞膜信号转导途径，选FAS可能狭隘，你加上BCL和BAX，这几个上游分子，如果有兴趣，可以考虑caspase家族，另外做组化，可能不太合适，做western 把咯他吧，caspase可以做ELISA

skytree[使用道具]
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发表于 2012-8-31 12:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

各位大侠,我想养胃癌细胞株SCG7901,也是我第一次养细胞,请问哪位能告诉我该怎么做?当然是越详细越好啦,谢谢!

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很好养，让你充满信心，
细胞培养液，常规的1640即可
血清，四季青的新生牛血清10%
至于细胞培养过程，园子里很多了，按步就班来就行。

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