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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

yysr238[使用道具]
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301

发表于 2012-8-31 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #301 u234 的帖子

有文献报道消化时可以用一型胶原酶消化（如果你需要相关文献再联系），两种胶原酶消化的靶组织是不一样的，一型胶原酶消化内皮的胶原基质，二型消化软骨等胶原，但是不是绝对的，因为我们知道一种组织通常含有两种以上的胶原成分，所以没有绝对的限制＆区别那种组织一定要用那种类型的胶原，不过你可以针对组织中为主的胶原来选择胶原酶。有问题再联系
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xue258[使用道具]
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302

发表于 2012-8-31 12:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

直接用刀豆蛋白A刺激大鼠脾细胞悬液，然后再用CD3抗体分选出T细胞，分选出T细胞后如何维持它的增殖，请教各位高手
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发表于 2012-8-31 13:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #303 xue258 的帖子

常规的方法是加IL-2，培养来建立T细胞系。
也有采用SV40 T以及端粒酶（TERT）抗原转染来永生化的。
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yhz1973[使用道具]
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304

发表于 2012-8-31 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
如题，请教那位战友做过，还望不吝赐教。Search过园子里的帖子，想过用有限稀释法做，可是觉得每孔1~2个细胞，这么少的数量细胞怎么好长得起来呢，我养的是小鼠淋巴细胞，也不是那种增殖能力比较强的细胞系。还有，刺激抗原量加多少合适呢？盼复，甚谢！！
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发表于 2012-8-31 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #305 yhz1973 的帖子

所谓克隆，就是指获得单一细胞来源的细胞群。所以，为了保证您得到的是克隆，还是应该加一个细胞。

一般的做法是调解细胞浓度至0.5-1个细胞/孔。至于抗原的量加多少，您应该有类似的预试验，在克隆化之前test一下。
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ffooll[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问诱导大鼠的间充干细胞能不能用人或其他类的生长因子，还是一定要用大鼠的。谢谢各位大侠
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发表于 2012-8-31 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 ffooll 于 2012-8-31 13:01 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')
请问诱导大鼠的间充干细胞能不能用人或其他类的生长因子，还是一定要用大鼠的。谢谢各位大侠

我没有具体做过。
一般情况下，细胞因子有向下的兼容性，也就人的细胞因子可以作用于猿、猴、鼠等，但倒过来不行。
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发表于 2012-8-31 13:02 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

有不分泌甲胎蛋白且能在皮下移植的鼠肝癌细胞吗？谢谢各位站友
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发表于 2012-8-31 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 zranqi_1 于 2012-8-31 13:02 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

有不分泌甲胎蛋白且能在皮下移植的鼠肝癌细胞吗？谢谢各位站友

AFP-negative human hepatoma cell line (SMMC-7721)
可以在裸鼠皮下建立模型。
其它的afp-negative 的肝癌细胞系还有：HLE，HCC和SK-Hep1
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yysr238[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:03 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我正在做小鼠肝细胞原代培养,做了几次,都不是很好,方法为肝组织切成1mm小块,洗,胶原酶Ⅳ消化(2min,5min,8min,12min,20min都试过),DMEM+10%FBS+PS+SIT培养。希望有经验的战友给予帮助。
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