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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

whitesheep[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可以直接上医院买针剂得啊，方便又实用，还省老板的money！
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abc816[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位老师我查了一下关于KRP缓冲液的标准配置方法，也参考了一下其他师兄师姐的配方，发现有很多种不同的方法，不知道采用哪种比较好，有没有标准的配置方法？我是用来做葡萄糖吸收实验的。
谢谢各位老师和师兄师姐的帮忙！
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缘yuan[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #323 abc816 的帖子

没有标准配方,对于不同细胞和组织配方都不一样.你可以查阅一下别人做过的用什么配方.我也是做葡萄糖吸收的,所用配方如下,仅供参考
1*KRP buffer: NaCl 131.2mM
KCl 4.71 mM
CaCl2 2.47mM
MgSO4 1.24 mM
磷酸钠 2.48 mM
HEPES 10 mM
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jkobn[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做微核实验，使用自配培养基
RPMI－1640 80ml
胎牛血清 20ml
青、链霉素各10000U
PHA 4ml(2.5mg/ml)
但是，经过全血培养，细胞长势不好，请各位帮忙，看是不是培养基中PHA的量不够，导致不能有效刺激细胞生长。我是新手，请多指教！急待回复！
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发表于 2012-8-31 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #325 jkobn 的帖子

有可能PHA的效价太低了，可以提高浓度，最好做一个梯度。
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misswu61[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
细胞不长也可能是血清的问题 血清的质量有的时候是很关键的，特别是做原代培养 ，还有酸碱度的调整，一般来讲是宜酸不宜碱
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发表于 2012-8-31 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

用的是20％的牛血清？？？我不知道你的细胞是不是就要求这个浓度，我们一般细胞培养使用的都是10％浓度的牛血清，37℃ 5％二氧化碳浓度。另外，1640培养液中要加入碳酸氢钠，以维持PH。
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发表于 2012-8-31 13:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在培养中呢遇到过类似的情况！！！你可以从几个方面去考虑，第一培养基的PH是否适合，第二细胞的接种量是否适合。第三血清是否质量可靠。多方面的去分析的话呢，也许会找到一定的答案。今年我刚培养细胞，开始的时候就出现了这样的情况，后来我找到了原因，是因为我的细胞接种良不够。现在克服了。
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发表于 2012-8-31 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

采血时选用肝素抗凝。
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发表于 2012-8-31 13:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
借楼主的帖子也问下我的问题，呵呵～

准备养单核细胞（THP-1)

看师兄的文章里提到他在配制RPMI-1640培养基时加入了2 mML-谷氨酰胺、1.5g/L 碳酸氢钠、10mM HEPES, 1.0mM 丙酮酸钠、5×10-5 M 2-巯基乙醇、

可是我查阅网上RPMI-1640（粉剂）的说明书里说包含了上述的东西

我想请教一下各位，我还需要加这些东西吗？

谢谢～
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