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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

zzzz[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问哪些人做过这种细胞的永生化.大家一起交流吧.期待你的快速回答!!
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newway[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #352 zzzz 的帖子

做过骨髓细胞的永生化。用人的端粒酶转染小鼠骨髓细胞，然后用G418筛选，最后得到了抗性细胞，当hTERT并未能使小鼠骨髓细胞永生化，也未出现恶性表型。抗性细胞可以不依赖造血因子而生长，但仍然会发生凋亡。

细胞永生化的最常用方法，是转染SV40的大T抗原，这是一种常规的方法。也有同时转染hTERT的报导。有些细胞公司单单采用hTERT来使细胞永生化，不知他们是怎么做得。
希望对您有些帮助。
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ALALA[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

最近在作关于细胞周期方面的实验，涉及到了细胞周期中各个时相的共聚焦，这个技术上没什么问题，能够得到好的图像，但是自己对于结果的判断却始终是模糊的，查了一些文献，给出的图片也都看得云山雾罩。特向各位大侠求助

那位能给出prophase ,metaphase,anaphase 的共聚焦图片，并解释一下。实在是自己搞不定了，希望有高人指点一下！！

多谢！！
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cocacola[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近在作关于细胞周期方面的实验，涉及到了细胞周期中各个时相的共聚焦，这个技术上没什么问题，能够得到好的图像，但是自己对于结果的判断却始终是模糊的，查了一些文献，给出的图片也都看得云山雾罩。特向各位大侠求助

那位能给出prophase ,metaphase,anaphase 的共聚焦图片，并解释一下。实在是自己搞不定了，希望有高人指点一下！！

——————————————————————————————————————————————————

多谢！！
请问您是通过哪些染料来观察细胞周期呢？DAPI和a-tubulin吗？具体的protocol是怎么样的啊，请指教！
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发表于 2012-8-31 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

本人用fluo-3/AM标记细胞内钙，严格按照步骤清洗细胞，但在上镜观察时在细胞的周围总有一些红色的物质，照成照片后就变为绿色的，显得细胞及其不干净，开始以为负载后未冲洗干净，后来加大冲洗力度，细胞损失了不少可还是有这些红色的物质，不只何原因？如何能解决？
另外 ，我即时加入了一种可以增加细胞内钙的药物，但是未见细胞亮度明显改变，排除药物的原因，有人认为是因为细胞外环境中的钙离子浓度太小，所以建议我在细胞外环境中加入钙离子，不知有道理否？如何加入？
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发表于 2012-8-31 13:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用Boyden Chamber法检测细胞侵袭能力，检测的细胞是乳腺癌MDA-MB-231细胞，我已经购买的是24孔板和12 um膜孔直径的Millicell chamber，我要计数的是穿过聚碳酸酯膜的细胞数。但是我的师兄说我不该买这么大孔径，请问是不是应该根据MDA-MB-231细胞的直径来选择膜的孔径大小呢，有没有谁做过这个实验，能告诉我吗？我应该买多大um 的Millicell chamber呢？
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发表于 2012-8-31 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #361 join 的帖子

肿瘤的侵袭能力一般选用8 um的膜。这里有关Transwell的应用指南，上面有各种实验的不同的膜的选择标准。
cuturl('http://www.sciequip.com.cn/product.asp?SubProductID=1657')
我本来想直接复制下来贴上来，可是那个网页不支持复制；只有你自己去看了。
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我佛慈悲[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我最近用含10%FBS的DMEM（GIBCO）复苏B95a细胞，18小时后发现很多细胞贴壁后都是圆形，且似乎贴附不牢，我想请教养过B95a细胞的大虾，B95a细胞贴壁后是什么形态？
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yychen[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 我佛慈悲 于 2012-8-31 13:31 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

我最近用含10%FBS的DMEM（GIBCO）复苏B95a细胞，18小时后发现很多细胞贴壁后都是圆形，且似乎贴附不牢，我想请教养过B95a细胞的大虾，B95a细胞贴壁后是什么形态？ ...


我也在做这个细胞的培养，细胞在培养过程中是梭形和圆形两种的，如果细胞长得很密的时后，可以看到部分细胞悬浮状态。这个细胞株是EB病毒转化的，所以它会向细胞上清中分泌病毒，所以操作时一定要小心啊，应该在P2实验室里做啊。下面是我所照的一幅照片，


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附件
2012-8-31 13:31
25076821 (1).jpg (60.22 KB)
 
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kewanqi2011[使用道具]
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发表于 2012-8-31 13:32 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问，养B95a时，你用的是什么培养基？
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