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标题:[总结帖]细胞版疑难帖

daod[使用道具]
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各位朋友你们好:
我现在裂解细胞提出胞浆和胞液的某个蛋白,需要细胞骨架 缓冲液(CSK Buffer),但我看了些资料,有的差别很大, 不知道那里提供的准确。
另外是否有买配制好的?
版本1:0.5% Triton X-100 ,5mMNaCl, 10mM Pipes, 3M MgCl2, 300mM sucrose and protease inhibitor cocktail tablets
版本2:CSK buffer (50 mM NaC1,10 mM Pipes, pH 6.8, 3 mM MgCI2, 0.5% Triton X-100, 300 mM sucrose,1.2 mM PMSF, 10 ~g/mi leupeptin)
版本3:CSK-TritonX-100 细胞骨架缓冲液:10mol/L PIPES,100mol/L KCl,300 mmol/L sucrose, 3mmol/L MgCl2, 1mmol/L EGTA,1.2mol/L PMSF,2mg/L aportinin, 0.5%(v/v) Triton Ⅹ-100, pH 6.8],
版本4:1% Triton X-100, 1% Nonidet P-40, 0.2 mmol/L leupeptin, 10 mmol/L Pefablock, 2.77 nmol/L aprotinin, 10mmol/L NaF and 1 mmol/L NaVO3 in PBS)
版本5:10 mmol/L PIPES, 100 mmol/L KCl, 300 mmol/L蔗糖,3 mmol/L MgCl2, 1 mmol/L EGTA, 1.2 mmol/L PMSF,1% TritonX-100, pH=6.8
很多版本 ,我看了一下,主要是在NaCl的浓度上,有的还有加KCl,请问高手, 那个好一些。 
另外M-缓冲液作用是什么?? 是相当于CSK 缓冲液吗?
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ffooll[使用道具]
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请问各位站友:
adenovirus 12-SV40 virus 转染的人晶状体上皮细胞会失去转分化能力吗?
adenovirus 12-SV40 virus 转染的人晶状体上皮细胞有什么特点?会影响生长因子对其转分化作用吗?

谢谢!
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831226[使用道具]
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植物细胞培养的激素比如IIA/KT,对人会起作用吗?如果培养的产物用来做食品,回引起残留问题吗?
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yonger[使用道具]
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我最近做哮喘模型,肺泡灌洗液中白细胞和嗜酸粒细胞记数较少,但我的脾细胞培养中发现了较多的嗜酸粒细胞(制备脾细胞时未用淋巴细胞分离液),我养脾细胞只养三天然后取上清液测细胞因子。各位高手请问我的哮喘模型是否成功?
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lixi559[使用道具]
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我准备开展流式细胞术测HLA-B27项目,没有这方面的经验,请教各位站友:
1.单用抗HLA-B27荧光抗体可以吗?还是需要HLA-B27/CD3双标记抗体?
2.如何报告结果?
3.按照试剂说明书操作就可以吗?有什么注意事项?
4.各位用的是哪家公司的抗体,价格如何?
多谢!!!
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tangxin_80[使用道具]
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我们用的是HLA-B27/CD3双标记抗体,BD的,北京利文公司代理,流式的抗体都不便宜
报告数值
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气泡[使用道具]
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老师是哪家单位,我们用的是HLA-B27/CD3双标记抗体,BD的,直接出来数值,价格在5000-6000之间,可以做100t。
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zhezhe[使用道具]
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1.BD公司的是HLA-B27/CD3双标抗体,Coulter是HLA-B27/B27双标抗体。两个都可以选择,但个人建议使用BD的试剂,因为其中有校准微粒,较少受人的主观因素影响。Coulter的试剂中没有校准物,说明书判定标准写得也不清楚,所以操作者做判断时(特别是对于在Cutoff值附近的样本),有时需要一些经验。
2.报告结果只报阴阳即可。像阳性细胞百分比、荧光强度等可不报,报了的话临床会问你很多问题,自找麻烦。
3.BD的按照说明书操作即可,Coulter的说明书写得笼统不清晰,操作时需找公司的人帮你设一下模板,确定一下判定标准。BD的试剂在别的仪器上操作的流程基本相似,但需要以线性方式显示坐标轴。可以查查文献参考一下。
4.现在市面上基本就这两家的试剂,其他厂家的试剂都是模仿Coulter的原理,价格如楼上。
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zsxan1990[使用道具]
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各位战友:
我想检索一下,哪个细胞或者组织中TNFα和IL-6的含量最高,以及量.
不胜感激!
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ququer787[使用道具]
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本人用fluo-3/AM标记细胞内钙,严格按照步骤清洗细胞,但在上镜观察时在细胞的周围总有一些红色的物质,照成照片后就变为绿色的,显得细胞及其不干净,开始以为负载后未冲洗干净,后来加大冲洗力度,细胞损失了不少可还是有这些红色的物质,不只何原因?如何能解决?
另外 ,我即时加入了一种可以增加细胞内钙的药物,但是未见细胞亮度明显改变,排除药物的原因,有人认为是因为细胞外环境中的钙离子浓度太小,所以建议我在细胞外环境中加入钙离子,不知有道理否?如何加入?
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