小中大
各位好，我来报个到．
因为课题缘故，需要培养人血管平滑肌细胞．我希望从脐带血管中获得ＳＭＣ，但参考了教科书方法和文献方法，均告失败．我把收细胞过程写出，请大侠们会会诊吧，希望能早日养出细胞来．谢谢
组织块法：
１．剖宫产所取脐带，４度无菌带回，０．２５％氯霉素冲洗三次；
２．分离出脐动脉，解剖显微镜下剥除外膜，切为小段，ＰＢＳ洗净血渍；
３．以眼科剪将动脉剪为小块，再以显微外科剪将其剪为１mm3大小；
４．滴几滴培养液于培养皿中，均匀铺满底部，将组织块均匀分散于培养皿，间隔０．５cm，全过程保证组织块湿润状态．
５．过夜加液．（２０％ＦＢＳ的Ｍ１９９）
以此方法，组织块贴壁后，边缘清楚，皿底清洁，但２周未见细胞爬出（７天时换一半液）
消化法：
剪碎方法同贴壁法，剪碎组织后，试过的消化方案如下：
Ｉ型胶原酶，以０．１％的浓度，分别消化０．５，１，１．５，２小时（３７度），过夜（４度），组织块已基本消化完全，滤网过滤后离心，收集，以２０％ＦＢＳ的Ｍ１９９培养，但２４小时未见细胞贴壁．仅看到大量的碎屑和少量红细胞，和众多类似细胞的亮圆点．
脐动脉的感觉是切碎后就象鼻涕一
