小中大转膜条件基本可以
一抗与二抗浓度均较高
建议:先做二抗的稀释度(同时不同的ECL均需检测)
用点杂交
用1倍TBS或PBS稀释二抗
做不同的梯度
比如1:1000,1:2000,1:4000
稀释好后各取1ul点在NC膜上
RT干燥
加发光液
曝光
确定二抗的合适稀释度
下一步
做一抗的稀释度
一抗也可以做几个不同的稀释度来摸条件
转膜后把膜剪成小条,加不同的稀释度的一抗
孵育进行后续步骤
good luck
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您提到的检测二抗的稀释度,用的是新NC膜吗?并不是转过了蛋白的那个膜是吧,在一个膜上同时进行几个点杂交?谢谢啊