小中大您好 我是新手想请教几个问题
1、我用BCA方法测的蛋白浓度,用曲线计算后大约是10毫克每毫升,上样量是20微升,GAPDH的条带特别宽相邻的泳道,染色后都连在一起,是不是上样量太多?
2、以BCA法测得的蛋白浓度条内参是不是不准确,该怎样调平?
3、我跑的条带有的呈锯齿状,还有的在染色条带周围还有较淡的染色像扩散了一样,是怎麽回事?
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哇
1,上样量太大了,一般蛋白的上样量为20~40ug总蛋白
上样量的大小取决于电泳槽上样孔大小与凝胶的厚度
2,BCA测定蛋白浓度的时候想要准确的话应该至少做双管测定
想让内参很匀的话可以做一次WB,把条带的IOD值读出来,通过IOD值再来调整总蛋白的上样量
3,分离胶在配制的时候没有充分混匀
没有凝充分
浓缩胶与分离胶同样没有处理好
都会出现你说的这种情况
good luck