蛋白质与蛋白组学

请教一下，我想配30%Acr-Bis（29：1），买回来的amresco的干粉标注的是40g，使用说明让蒸馏水溶解定容到100ml，这岂不是成了40%的溶液了？是否应该定容到120多ml？

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是的

请教一下，我想配30%Acr-Bis（29：1），买回来的amresco的干粉标注的是40g，使用说明让蒸馏水溶解定容到100ml，这岂不是成了40%的溶液了？是否应该定容到120多ml？

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应该120ml
不好定容
直接加120ml水溶解

我在做小鼠脑蛋白的提取，用的是公司购买的RIPA裂解液，取一半脑组织约200mg，加1ml裂解液，10ul100mMPMSF，电动匀浆器，匀浆之后，冰上半小时，13，000rpm离心半小时，取上清，电泳
12%PAGE胶，电泳，考染后看不到15KD以下的条带，
请有经验的战友，指点一下，到底哪里操作有问题，提取小分子量蛋白有什么需要注意的地方，谢谢，我的目的蛋白11KD ，
另外我的小蛋白SUMO会和其他蛋白结合，也会杂下来我想同时看100以上的条带，是否该选择梯度胶，浓度范围应选择多少呢，期待解答，谢谢

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裂解液的量有些少
一般用1：9或者1：10（组织重量：裂解液量）
100K不需要用梯度胶
15K以下条带本来就较少

分离胶灌完后是用蒸馏水液封的吗？我以前用乙醇封也出现类似的问题，后来用水封就解决了。如果气泡不大，不会有影响的，我染胶试过。

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正确的方法是用饱和的异丁醇来封
一般用蒸馏水封也挺好
染胶影响不大但是转膜后还是有影响的
看气泡的位置在那

用人的血浆做为一抗？
不是很了解
我做过血浆 Fibrinogen alpha，beta的WB
条件摸好没有非特异性条带
good luck

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您能告诉我一下您跑 Fibrinogen 的具体情况吗？谢谢啊，我是新手，我以后也要跑，现在才刚刚开始试着跑内参，非常感谢！
包括电泳浓缩和分离胶的浓度和时间，转膜条件，上样量，一抗和二抗稀释度等等，谢谢啊！！

先确定二抗的稀释度
再做一抗的预实验

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老师您好，我试了二抗1：8000，一抗1：1000，结果背影稍微好点，但还是脏，而且连marker也出现条带了，如图所示。这种情况是继续稀释一抗呢还是继续稀释二抗呢？谢谢。