小中大ECL的孵育时间不是由自己决定的，说明书有规定，大部分是孵育一分钟时间后就可以沥干，用保鲜膜包好放入暗盒固定。不同的ECL结合HRP出现荧光的时间不一样。我用过两种ECL ，一种是碧云天生产的AB液 ，每瓶各6.25ml，价格一百多，挺贵的；另外一种是北京全式金生产的，ABC液，AB各50ml，C瓶75ul，对比之后发现全是金的效果似乎更好一些，价格也是一百多。在暗室中大概要过30S到1min左右才开始出现荧光条带，越来越强。因此，关上暗盒前你得先观察清楚荧光条带的强弱再判断曝光时间。一般如果能明显看到条带的话，可以从30s开始摸索，1min、3min作对照；看不到荧光的话的确很令人沮丧，但不要轻易放弃，你可以压片10min，有时候也是能出结果的。因为我在没有红灯的环境中操作，显影时间没特别关注，每次显影时间大概在2min左右，定影后感觉效果还可以。不知道其他战友情况是怎么样的
