蛋白质与蛋白组学 » 讨论区 » 经验共享 » 【求助】关于TNF-a检测

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 11  1/2 12››
 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴
打印 | 推荐 | 订阅 | 收藏

标题:【求助】关于TNF-a检测

bananapeople[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75315
精华 1
积分 492
帖子 620
信誉分 102
可用分 3964
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
1

发表于 2013-12-11 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】关于TNF-a检测


刚开始做这个方面的实验，想检测细胞上清中TNF－a的含量，除了采用ELISA，是不是可以用western blot 检测呢，因为实验不需要准确定量，只要有变化趋势就ok，而且进口的ELISA的盒子比较贵，不知道有没有做这个方面的高手，来指教一下啊，谢了。在做wb的过程中有没有什么需要注意的呢？
P.S 不知道有没有关于上清中的细胞因子用WB检测的文献呢，发几个来参考一下吧。
//BOW
顶部
greenbee[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 79370
精华 0
积分 710
帖子 1119
信誉分 100
可用分 6368
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
2

发表于 2013-12-11 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

应该可以的，还可以做PCR
顶部
bs4665[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75127
精华 0
积分 505
帖子 650
信誉分 100
可用分 4136
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-19
状态 离线
3

发表于 2013-12-11 15:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

买抗体和其他做WB的试剂也不便宜吧。
ilisa的盒子也有不到2000的，既然不需要准确定量，国产进口都一样
顶部
bananapeople[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75315
精华 1
积分 492
帖子 620
信誉分 102
可用分 3964
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
4

发表于 2013-12-11 15:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 bs4665 于 2013-12-11 15:18 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

买抗体和其他做WB的试剂也不便宜吧。
ilisa的盒子也有不到2000的，既然不需要准确定量，国产进口都一样

只是拿TNF-a做一个检测指标，WB的试剂是共用的，还好吧，有没有人做过啊，告诉我个确定的答案好不？
顶部
taoshengyijiu[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77450
精华 0
积分 467
帖子 614
信誉分 100
可用分 3876
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-17
状态 离线
5

发表于 2013-12-11 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

没做过哦，但是可以严重的告诉你：一些TNFα Antibody 是可以用于WB的。
顶部
remenb[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 75236
精华 0
积分 631
帖子 941
信誉分 100
可用分 5531
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-20
状态 离线
6

发表于 2013-12-11 15:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我在做，就是还没出结果！
顶部
gogo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77052
精华 0
积分 821
帖子 1341
信誉分 100
可用分 7487
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-12
状态 离线
7

发表于 2013-12-11 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

it's difficult for you to detect TNF-a in the supernatant using western blot. One reason is the concentration is lower. The other reason is the M.W of tnf-a is about 17kD, it's a little small to detect using western. I suggest you that the elisa is the first choice, it's sensitive to detect only 4 pmol of TNF, and it's also easy to do.
顶部
abc816[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77362
精华 0
积分 775
帖子 1190
信誉分 100
可用分 6817
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
8

发表于 2013-12-11 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

当然可以用WB了，而且不需要检测两端的抗体，只要一抗就行了，加上酶联价格应该比ELISA 便宜
顶部
bananapeople[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 75315
精华 1
积分 492
帖子 620
信誉分 102
可用分 3964
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-10-21
状态 离线
9

发表于 2013-12-11 17:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做出来了！细胞上清用了western blot 内参用了相应细胞下细胞中的内参β-actin（各个对应的来）

上清中TNF浓度是很低，所以我用了超滤浓缩管（millipore超滤浓缩管，根据17/3约=5选择超滤浓缩管），将上清液超滤浓缩了，结果就做出来了很漂亮的条带

至于文献参考，是有做上清wb的但是没有相应的上清内参，我用了细胞内内参 就是不知道会不会不被承认！
顶部
wood533[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76132
精华 0
积分 863
帖子 1385
信誉分 100
可用分 7745
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-1
状态 离线
10

发表于 2013-12-11 17:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

这个东西跟elisa一样吧，如果eliasa不需要内参的话，上清是不是也不需要内参呢，不过还是恭喜啊，能做出来就好。
顶部
 11  1/2 12››