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标题:【求助】出现了比较诡异的条带

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发表于 2014-2-8 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

【求助】出现了比较诡异的条带


向大家介绍一下情况：1.转膜前考马斯亮蓝染色：蛋白没有问题2.转膜后有一个是比较大的分子量的（117KD），没有转过去的。我的目的条带分子量是85KD左右。预电泳是70V.30mins,第一阶段电泳：30v ，70mins .第二阶段电泳：100v，90vmins.转膜时间：100v，80mins。显影时压片压了15分钟后就出现比较诡异的条带。请战友们分析一下这个问题，多谢啦！我上传了附件，帮忙看一下吧，问过老师，老师解释说可能是上样有问题，或者裂解液有问题


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发表于 2014-2-8 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

拜托战友们，我很是纳闷，找不到原因。人多力量大，希望能有点建议给我。多谢了啊
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发表于 2014-2-8 13:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

是组织样品吗?
如果是可能是脂肪之类的物质混在里面,影响电泳
上样量要保证没个上样孔的体积和浓度都一致
而且我没看明白这是一个样品出了多条带,还是你上了三个或六个样
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发表于 2014-2-8 13:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

样品有经过低温离心吗?
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 小中大


QUOTE:
原帖由 am10 于 2014-2-8 13:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

是组织样品吗?
如果是可能是脂肪之类的物质混在里面,影响电泳
上样量要保证没个上样孔的体积和浓度都一致
而且我没看明白这是一个样品出了多条带,还是你上了三个或六个样 ...

是我上了六个样，并且每个孔都保证了蛋白量是40ug.我提蛋白是从组织提取的啊，真不知道是什么原因引起来的。
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发表于 2014-2-8 13:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 am10 于 2014-2-8 13:20 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

样品有经过低温离心吗?

经过低温离心了啊。转膜前考马斯亮蓝染色后，凝胶上的蛋白跑出来的条带很好啊
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发表于 2014-2-8 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大


QUOTE:
原帖由 911 于 2014-2-8 13:19 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '%s')

向大家介绍一下情况：1.转膜前考马斯亮蓝染色：蛋白没有问题2.转膜后有一个是比较大的分子量的（117KD），没有转过去的。我的目的条带分子量是85KD左右。预电泳是70V.30mins,第一阶段电泳：30v ，70mins .第二阶段电泳：100v，90vmins ...

这是转膜前染色所示条带：


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发表于 2014-2-8 13:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这是转膜前染色所示条带：

====================

这是转膜后所染 的条带


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发表于 2014-2-8 13:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

觉得应该是样品的问题
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发表于 2014-2-8 13:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
电泳的样本条带有些弥散。要么是buffer的问题，要么是样品的问题。
变性前将buffer回复到室温待其中的SDS重新完全溶解后再加入样品，混合后煮沸变性，再瞬时离心后上样。
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