【讨论组】实验室警示录 - 经验共享

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标题:【讨论组】实验室警示录

huifeng0516[使用道具]
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发表于 2014-3-25 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【1】在动物房养动物的时候，一定要把标签写清楚，并要经常去看一下。当然用动物的时候，一定要看一下标签，上面写的是不是自己的名字，从而确定动物是不是自己的。我有一同学，在动物房养大鼠，因为鼠笼比较多，所以就把鼠笼放到了一个角落，在每排的第一个笼子上写上了自己的名字。结果后来又有人把自己的鼠笼放到了和我同学相临的地方。而有一次用的时候，没在意，结果把我同学的大部分大鼠都给用了。我同学的大鼠模型都做了两个多月了，当时真是想死的心都有。
【2】不懂的时候一定要问，不要不好意思。有一同学，晚上加点做试验，当把要冻存的东西放入－70度冰箱时，发现冰箱在报警（后来估计可能是冰箱内霜较多了，需要除霜了），这个同学估计当时也挺着急的，就想了一个办法，把电源给拔了，当然冰箱是不响了，结果大家都知道了，很多人放在冰箱内的东西（当然也包括他自己的）都废了。
【3】在往液氮罐里放东西的时候，很多人都用纱布缝一个布袋，用绳子扎口，把要冻存的冻存管和组织什么的放到纱布袋里然后放入液氮罐里，绳子在外边，这个方法很好。但缝纱布袋的时候一定要注意，不要缝的过大，也不要缝成正方形。因为当里面放的东西比较多的时候，而布袋的宽度又比较大，在液氮里，就会变硬了，用的时候，很有可能就拉不出来了。
【4】当要还给别人液氮罐或者想把液氮罐里的液氮倒空时，一定要把液氮倒入其他的液氮罐。千万不要倒入下水道。我有一次就是把液氮倒入了下水道，结果下水道下面的塑料接口断了，而且液氮使水结成冰后，还会使液体向上溅，很危险的。
【5】消完毒的离心管蒸干时温度不要过高，可以在手提式高压锅内，把盖子打开，直接加热蒸干。我有一次把离心管放到烘干箱内，温度调到了160度，结果离心管全变形了。
【6】离心时离心管和离心机一定要配套。我一同学有一次离心，用的不是和离心机配套的离心管，长度比较短，结果离心后发现离心管掉到了里面，取不出来了，想了很多办法，费了很大的力气，最后用带针头的注射器扎入后离心管后，才把离心管拔了出来。

utt0989[使用道具]
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发表于 2014-3-25 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1.EB几乎每个实验室都会用到。配agarose胶，跑agarose电泳，我们实验室的要求是：每次做实验两只手只允许戴一次手套，一只手不允许戴。戴一只手，可以保证不会乱摸。
2.SDS-PAGE电泳，胶经常会不凝，漏。所以我每次都多加20%的过硫酸铵和TEMED。
3.蛋白的纯化的柱子好保存好。
4.离心机一定要平衡。
5.培养细胞的瓶子要洗干净，酸洗，水洗，蒸馏水冲，干燥，灭菌。
6.酶用好后，马上放冰箱。用时最好放冰上。
7.灭菌，有钱的实验室，方便的，一放，2个小时后去拿一下就好了。没钱的实验，用的还是老掉牙的灭菌锅。灭菌时要看牢的。
8.最害怕的是乙醚，酒精，不要遇明火。
9.有些东西无菌很重要。
最后；做实验时间要统筹安排。

831226[使用道具]
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发表于 2014-3-25 17:22 资料个人空间短消息加为好友

小中大

也来说两句吧：
1.注意电器的使用：首先是必须了解实验器材的使用规范，最好是仔细的翻看说明书。离开实验室的时候，要关电器，断电。
2.注意有毒药品的使用和保存：有毒药品要特别的保存，要注意密闭保存，注意有毒药品间的相互作用。有毒药品使用的时候要注意自身的保护，也要注意不污染别人。有些有毒药品是控制药品，要注意不要保管不要流出外面。
3.细胞培养：注意无菌操作，最好使用生物安全柜，尤其是做腺病毒的时候。细胞的脯箱要定期的消毒，下面的那盆水也要定期更换。培养用的细胞瓶最好是一次性的，如果用瓶要洗干净，不要留有杂质，影响虚报的培养。
4.蛋白电泳：很多材料是有毒的，不要以为很干净，要注意自身的保护。
5.还有就是紫外线灯，有的时候会忘记关。

jujuba[使用道具]
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发表于 2014-3-25 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

【1】做western blot的“化学发光，显影，定影”这一步时，要注意胶片不要见光。我有一次，因为曝光的次数比较多，就有些疏忽了，胶片盒的盖子忘记盖了就把灯打开了，发现后吓坏了。幸好有黑纸包着，再用时发现只是所有胶片的一边不能用了。
【2】做western blot的“化学发光，显影，定影”这一步时，X－光片放在膜上，一旦放上，便不能移动。有一次因为膜上的信号较强，要缩短曝光的时间，我就用手在上面按了一下。结果胶片上的条带的确比较适中，但是细看发现有移动的痕迹而不能用。
【3】做western blot的“SDS－PAGE电泳”灌胶时，加水液封时速度一定要慢。我开始做的时候，加水的速度比较快，结果把胶冲变形了。
【4】用离心法提取细胞时的转速不要超过1000转/分钟（尽管多文献上都大于这个数值），时间一般不超过10分钟，否则会造成细胞活力下降或者死亡。我有一次分离大鼠肺泡巨噬细胞时，用的是3000转/分钟，离心10分钟，结果细胞没死，但是细胞的活力下降，很不容易生长。
【5】细胞培养时一定要注意细胞的密度，特别是原代培养的细胞不容易获得时。我原代培养大鼠的肺泡巨噬细胞，从每只大鼠上提取的巨噬细胞放到六孔板上，结果发现细胞生长的很慢，包括换培养液、增加胎牛血清的浓度等很多办法都用了，结果也不理想。后来换成了12孔板就好了，考虑开始是因为细胞的密度太小引起的。
【6】细胞培养无菌操作很重要。喷酒精装置的应用：制作很简单，用过的化妆品，嗻哩水，理发店理发前往头发上喷水的瓶子及其他一些有喷水功能的瓶子（能喷出很细的水珠），经过处理装上百分之75的酒精就可以了（也许以后会有厂家专门生产这种装置）。我用的是师姐留下来的一种护肤品的瓶子。常常往超净台台面，手上喷洒酒精，效果很好。
【7】培养箱内水盘里的水，用灭菌的超净水，每周更换一次（至少也要两周换一次）。换水前要用百分之75酒精消毒。水浴箱也要定期消毒（用百分之75酒精）换双蒸水。
【8】从培养箱内取东西前手一定要喷酒精，动作要快，可以先看好了，要取的东西在那里，然后快取。显微镜下观看细胞时间也不要过久，否则会对细胞有不利影响。
【9】细胞复苏：取出冷冻管后，一般是放入40 °C（以前多认为是37度）水槽中快速解冻。我是用止血钳夹住冻存管，将冻存管浸入水中（有的文献说瓶盖不要浸入水中。这和冻存管有关，不过现在的冻存管大多数都有防水功能的，我的冻存管为了保险用封口膜封口，外面又加了医用胶布，所以我不担心冻存管会进水），快速摇动1分钟。和我一起做试验的用的就是不把冻存管封口浸入水中的做法，复苏后他的细胞密度远远小于我的。

wmp1234[使用道具]
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发表于 2014-3-25 17:23 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也说两句：
1，配聚丙烯酰胺凝胶的时候，插梳子的时候有时候梳子会比较紧，然后插下去液体会溅出来，有一次溅到了脸上，还好带的眼镜。要注意轻轻的插，头不要离的太近；
2，还有一次，培养瓶拧的没对上口，就是别着了，拧不开了，同事使劲一扭，瓶子碎了，碎玻璃把手割破了，血直流，后来到医院缝了几针。所以对玻璃的东西一定要小心。

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发表于 2014-3-25 17:24 资料个人空间短消息加为好友

小中大

1原代培养时，动物的消毒也一定要注意，尤其是现在是夏天，我一般把动物在缓冲间用酒精棉球擦拭一遍，换一个照过紫外的容器装着，拿进细胞间。
2保持实验台的干净整洁,尽量保持实验台上所放物品少一些,并且保持实验台里的东西是专台专用。
3 水浴箱是个大问题，我们实验室有次细胞很严重的污染事件，哪里都没出问题，后来查了水浴箱中的水，发现了很多大肠杆菌。所以建议水浴箱一定要及时将脏水倒掉，然后用75％酒精擦洗箱内，最后换上蒸馏水。
4细胞室在使用前最好用福尔马林进行熏蒸一下，比较安全，每周至少用消毒水去擦细胞室地面一次。
5 细胞瓶子，等所用的物品，最好自己全部准备，不要让别人代理，这样那里有问题，自己也知道，不然一旦细胞出了问题，找原因很困难。只能全部扔掉。
6用移液器插取枪头时，不宜作上下运动，常此以往将会影响移液器使用寿命。稍微左旋或右旋即可插紧。
7孵箱经常被打开，所以不是无菌环境，应注意尽量少打开孵箱，以免水分蒸发过快、污染或二氧化碳损失过多。
8吸嘴内尚存液体时，切勿将移液器平放活倒置，谨防液体流进移液器内部，造成污染，而且很难洗净。
9解冻细胞时最好先用一个塑料或不锈钢的杯子（500-1000ml)装上调好温度（38-41摄氏度）的洁净水，将冻存的细胞管从液氮中取出后甩一下表面及顶盖的液氮，然后迅速放在水中搅动，直至还有一小点冰渣，取出置4度或立即用酒精喷洗，然后在超净台继续后续操作。

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小中大

煮样要定闹钟哦，不然水干了，样也化了，煮样架子也没了。。。

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小中大

从蛋白制备到SDS-PAGE电泳,看似简单的过程,很多地方存在危险:
1 制备蛋白,特别是磷酸化的蛋白过程中,常常会选择应用磷酸化的蛋白酶抑制剂,而PMSF(苯甲磺酰氟)和叠氮钠均为常用的试剂,该两种物质均不是什么"善类",一定注意戴上你的手套.实际上,在所有的实验过程中,我们尽可能的戴着手套,有时候为了自己安全,有时候为了实验安全(比如蛋白质组研究中的每一步都需要避免我们对样本蛋白的"污染").
2 配胶:对于初次作WB的战友来说,聚丙烯酰氨的毒性可能认识不够,该物质通过皮肤吸收,而且具有积累毒性,一定注意不要弄到皮肤上,一旦中招,立即以水冲洗之,切记.
3 SDS: 电泳液配置过程中需要SDS,这玩意虽然没有什么毒,但是粉尘吸到气管里十分够呛的,所以,戴上口罩啦.

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发表于 2014-3-25 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

相关疾病：
烧伤
感谢楼主的组织及上面诸位战友的提醒！我的几次安全方面的失误，望同行引以为戒：
1.玻璃吸管放在烘箱里烤干的时候连同盛放的塑料篮子放入，因为急用温度开到80度，半个小时候后，浓烟和异味弥漫，一开烤箱－－塑料篮子熔化了。后来老师告诉我塑料的熔点是六十度，这是个生活常规。
2.从酸缸中取灌满浓硫酸的输液瓶时，手套衣服防护的很好，但是，快速流下的酸液溅起的液滴，不知道怎么越过眼睛溅到了眼里，感觉眼前一黑，眼睛疼，沿着鼻泪管一直呛到鼻腔。扔掉眼镜就把眼睛凑到水龙头下冲，一直用水洗到眼睛涩得快转不动了，还好，冲完去医院检查的时候说是只烧伤了眼睑。从此我遇到养细胞的所有的同学都警告他们酸，酸！
3.还有一个同实验室的犯的错误，关掉pcr机子的时候没有把电流调到最小，直接关的电源，第二天一通电源，机子烧坏了。

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发表于 2014-3-25 17:25 资料个人空间短消息加为好友

小中大

讲一讲我进实验室遇见的最危险的一次事故吧（对我而言）：
我初进实验室的时候，老板安排我做的是Pr的复性和表达，当时先后跟着一个师兄和师姐，没有接触过细胞实验。一次，一个室里的师兄让我帮助过滤细胞培养基，大家都知道，实验前要先用酒精擦拭实验台，意外的是，酒精棉被点着了，你们可能猜不到我的第一反应是什么，但是我做了人生中最大的一次虎事，平时的比起来就不算什么了：），我用手将酒精棉抓了起来，使劲攥了一下，可能是想将空气隔离，结果整个手就着了，当时烧了2个大水泡，就请假回家了。你们猜猜我是怎么处理着了的手的！！！

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