液质联用

我最近在做分子量4700左右的多电荷多肽定量检测的方法学建立。我用C18的柱子，10%甲酸乙腈做流动相，样品用50%甲酸乙腈溶解，定量下限太高100ng/ml。峰形也不好。而且有血浆基质抑制。对这类样品的的色谱分离条件请各位高人给与指教。谢谢！

10％甲酸乙腈？50%甲酸乙腈？就表达错误还是你就是含10％，50％甲酸的乙腈溶液？如果是这样干的就把这两样先改它吧。

确实是这样做的。用只有强酸条件下才会出峰。否则没有响应啊。

要强到这种程度啊，没见过不敢乱说。

不过偶还是建议你可以：

用<0.1％的甲酸水溶液和乙腈各50％混合溶液溶解样品，

然后流动相也用<0.1％的甲酸水溶液和乙腈，

乙腈从5％开始走梯度，用个大约10分钟左右到100％，保持5min。

2min前的切出离子源（血浆里有盐，会引起电离抑制和毛细管堵塞）。

一般的多肽在这种情况下会在2min以后出峰而跟盐分开不至于受到影响，同时灵敏度也会比较理想。在这个条件下出峰了以后再考虑如何优化。

多谢。

我用乙腈作流动相，2.1mm*100mm的C18柱标样只有强酸条件下在1.5min出峰。酸性稍弱1.5min就不出峰。这是为什么呢？

能不能把您建议的梯度变化说的具体点。小妹我是第一次作多肽。谢谢！

A 0.1%甲酸水溶液 B 乙腈

先用A和B各50%溶解标样，然后用针泵进样看看出不出你要的那个离子，我想一般是会出的，不出的话检查一下仪器，仪器正常再调整溶剂，可以考虑把乙腈换成甲醇。

上一步成功的话，B的梯度 5% 1min 线性15分钟，上升至100% 保持5分钟，看看你要的东西在哪里出峰，根据你的需要调整梯度程序。

我做蛋白质鉴定，LC-MS/MS测肽序列，都是用0。1% TFA溶解样品，0。1%甲酸 水-ACN梯度洗脱的的，我认为不可能酸性要那么强。

另外血浆样品要么先萃取，LLE,SPE都可以，要么用柱切换除盐后再进质谱。

可试C8或C4柱子

C8或换300A的C18

没看到楼主是做血浆，现在我想你的灵敏度低不是因为酸度的问题，而是梯度的问题。

因为你的流动相中乙腈的含量很高，所以你的东西是1.5分钟出峰，对于通常的流量和100mm的柱子来说，在一般的仪器上，这个时间应该是死体积，也就是说你的东西全都在死体积时出来了，没有一点保留。在死体积时出峰的问题在于，你血浆中的盐也都同时在这个地方跟你要的肽一起出来，高浓度的盐会对你的肽产生很强的电离抑制。因此你所要做的只是象我说的那样走一个梯度，让这个肽和盐分开，然后它才能出正常的峰。即使这样，你还要注意要把前面的一段切换到外面去不要进质谱，要不然你的离子源走不了几个样品就不行了。