小中大前辈您好：
看到您在论坛里发的关于细胞培养的帖子受益匪浅，我刚开始养乳鼠心肌细胞一个月，由于没有人指导，自己在论坛看到前辈们写的自己摸索，效果不是很好，在操作中有许多问题请前辈解答。
1，关于胰酶，我们用的是百分之0.25的胰酶，每次基本都做八只SD大鼠乳鼠，每次大约放4-5ml胰酶，第一次消化十分钟，第二次八分钟第三次六分钟。用磁力恒温加热不超过三十七度，用磁力搅拌慢慢搅动。一般离心四次以后就剩下很少的很难溶解的组织，一般我都会不去消化了，是不是不好。
2，每次取上清液的时候有很多粘稠的上清不容易取，取出上清以后大约每五毫升加一滴血清终止消化。
3，离心每次离心十分钟，离心两次，有时候沉淀不是很明显。
4，离心以后过滤，加半分之十五的胎牛血清和DMEM配置的培养基培养，要是十只鼠的话每次的培养基大约配置多少呢？是不是第二次换液的时候就得把血清浓度降低到百分之四啊？
5，十只鼠要是用三十毫升培养瓶的话需要几个？前几批细胞换液之前还活着，换液之后就全部死掉了，其中只有一次细胞贴壁，其他的没有贴壁情况，我是用差速贴壁的方法来纯化心肌细胞的。然后获得的纤维细胞也是换液之后就死掉了，很少贴壁的。
6，细胞的密度多少才适合呢？每次往瓶里种细胞的时候细胞数还是很多的，我一般是往培养瓶里加五毫升的细胞混悬液。
谢谢
