细胞世界

各位前辈:
关于消化我还是有些不懂，请教，每次消化的时候都会出现胶冻状的。八只鼠第一次消化加三毫升的百分之0.8的胰酶，第二次加一点五毫升，第三次加一点五毫升，有很多胶冻状的。上清液 不好吸取。我是要分别养心肌细胞和成纤维细胞。采用的是差时贴壁的方法，一般是60-90分钟。一般八只乳鼠加多少的胰酶合适呢？ 谢谢

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8只SD乳鼠（24h）的约2/3左右的心脏组织，消化液的量建议为3-5mL（0.08%trpsin+0.05%collagenase），最低不要低于3mL，不然很难吸掉上清，有较多的细胞DNA释放导致粘稠，多于5mL会比较容易引起消化过度；可以试试多次消化，每次培养箱静置消化8min，中途4min轻轻摇动几下，消化约10-12次，上清丢弃，剩下的心脏组织用含血清的培养基吹打多次，吹打三遍左右，得到的上清收集起来离心，差速贴壁接种细胞，差速贴壁的方法都差异不大，我一般是用60min两次，会稍好于90min一次的，心肌细胞纯度会较高。