小中大我是用的百分之0.08的胰酶，上次写错了。今天上午做了四只2天得SD乳鼠，取心脏大约2/3第一次加胰酶约2.5ml。然后消化效果仍然不好。请问是你所说的每次消化8分钟都加胰酶3ml么？还是第一次加三毫升，以后每次按照消化的量再加。我还要养心肌纤维细胞，所以上清液每次都保留，然后用血清中和，等最后一起离心，再差速贴壁。谢谢您的耐心指导。
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这位战友您好，回复比较晚，抱歉！
4只2d的SD乳鼠，心脏2/3左右，胰酶量可以适当的增加一些，一方面2d的SD乳鼠心脏可能会比24hr之内的大一些，个人觉得2-4mL都是可以的，原来摸索条件时一般用3只的，加入有2-3mL的酶液（SD乳鼠，24hr内新生）；但我有一个不太明白的地方，就是您所说的消化效果不好，是怎么得出结论的，是消化液在显微镜下观察，还是细胞跳不起来，然后感觉是消化结果不好导致的？其实我消化时并不是每一次的胰酶量都一致的，开始8次大约多一些，到后面4次时，一般缩减为原来的一半酶液量左右。
原代细胞培养目前我们使用的方法可能更多的需要依赖个人的操作（在有能够做出较好结果的客观条件前提下），如果个人操作不好，那么细胞状态大都不会好，或者是不稳定（次与次差异性较大），所以在实验过程中，可能需要多留心，多注意，多体会，认真的思考一些，哪些地方需要轻柔，哪些地方需要注意无菌（我们一般多用于加药，所以是无抗生素的），哪些地方需要慢一些，自己感悟出来的可能比别人说的会感受和体会更深也可能更有用，这就可能在更大程度上会使我们的结果会更好一些，更稳定一些！
