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标题:【讨论帖】心肌细胞培养互助

mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我测的是细胞内钙离子浓度和PH值，结果也不是很理想，我想主要是因为细胞的状态不好。也正在摸索阶段，你想知道些什么？你现在做什么？讲出来我们共同探讨
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mickeylin[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:15 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的细胞还是不行，上面粘的血细胞大片大片的，几乎都掩盖了心肌细胞，而且越是搏动有力的心肌细胞，上面粘的血细胞越多，我也挤过了啊，怎么还是这么郁闷呢？对了，我做的时候是不用针固定乳鼠的，而是直接沿胸骨左沿剪开一小口，一挤，心脏就出来了，直接剪下心室。问题是出在这儿吗？但剪下来的心肌我是泡在PBS里反复挤过了啊！望能指点迷津
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
尊敬的各位老师，请问心肌细胞培养有没有可能获得人的心肌细胞来培养，比如心胸外科手术，或者介入，或者购买；如果不能，那是用成年大鼠的还是新生乳鼠的心肌细胞对实验说服力强；

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好像没有看到过用人的心肌细胞做实验的，不知道有没有文献报道，或许要设计伦理问题吧，所以建议就放弃吧，除非你要做的是很尖端的实验。
至于选用新生乳鼠还是成年大鼠做实验，这得看你实验的具体需求了。一般用于心律失常、心肌坏死之类的可以选用新生乳鼠了；如果是心肌肥大可以采用成年大鼠。
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:16 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
培养基用DMEM，它的高糖和低糖的有什么区别；

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葡萄糖的含量不一样，这在论坛里可以搜索到的。
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有培养瓶用25平方厘米的还是75平方厘米的好些，用75平方厘米的是不是太大了，心肌细胞不容易接触生长波动；

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对于初学者，培养瓶还是用25cm2的吧，或者用24孔板或35mm的培养皿；
因为心肌细胞不能增殖的，所以纯化后，你直接接种到目的培养器皿中用于实验就可以了。
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:18 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是否不含培养基谷氨酰胺的更好，因这样可以减少纤维细胞的增值，使培养的心肌细胞更纯；

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好像没有这么一说吧，可以通过加Brdu，以及差速贴壁去除绝大多数的成纤维和内皮细胞，加上一般培养时间也比较短，所以不用太担心成纤维类细胞的污染。
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ukonptp[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
还有心肌细胞培养所用的缓冲液有哪些，配平PH值时用的标准液在哪里可以买到，具体怎样自己配制缓冲液，如Hank's液，PBS液等？

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要是嫌麻烦的话，直接配置PBS就可以了，论坛可以找到配方的，自己去找一下。
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ero11[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:19 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
1，第一次消化下来的上清要倒掉，你是这样做的吗？
2，你取心脏的方法可以，但是速度要快，每取下一个心脏都要先洗干净，把心室剪下来，放到干净的PBS里，再做下一个。
3，你胰酶浓度不要太高，0.1%就可以了。消化时搅拌速度一定要慢。
4，每次消化完后，吹打不要太用力，轻轻吹打就行了。
5，用差速贴壁法去除杂细胞的时间不要太长，细胞贴壁后就尽快换液。
6，最好只取心室就行了。
7，乳鼠在酒精里浸泡一会消毒后就可以做了，不要等乳鼠死了再做，这样容易有淤血。
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ero11[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:20 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
用激光共聚焦测心肌细胞内钙：如果是测动态钙的变化的话，建议用fluo3或fluo4，测定时在加完药，起效后，一定要用线扫描方式测定细胞内钙，要不其他方式就不能在短时间内测出细胞内钙的动态变化。
测定的细胞要在盖玻片上观测，否则激光透光率不好，观测效果差。可以用有机玻璃版，做成载玻片大小，厚度相似，在中间挖一孔。版侧面用两根空心的金属管和孔连通。试验时用透明胶或指甲油等将盖玻片贴在孔下方。这样细胞放在盖玻片上，用衡流泵从两金属管中间灌流细胞液，加药或荧光染料用微量进样器加入。保持37度。观测时就比较方便了。这种装置也有买的，一般是用来做膜片钳用的。
示意图如下：


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2015-5-11 18:20
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JK.jon[使用道具]
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发表于 2015-5-11 18:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教各位一个问题：我们实验室用的磁力搅拌器不可以控温，我又是第一次做心肌细胞的培养，前一次在培养是遇到一个很麻烦的事，每次消化时必须不断加入热水以保持温度在37度。这样就影响了试验的其他环节。请问各位有没有好的方法可以解决这一问题。
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