小中大1, 差速贴壁法主要是把心肌细胞和成纤维细胞分离,以纯化心肌细胞。成纤维细胞贴壁速度比心肌细胞快很多,基本上静置1-2小时即贴壁,这时候,心肌细胞还没贴壁,这样就能把贴壁的成纤维细胞去除。因此,留再原培养瓶中的是成纤维细胞,即杂细胞,而吸出的液体中则是心肌细胞应留住。
2,你用孕鼠腹内的胎鼠分离心肌细胞,这个我没有做过。一般乳鼠分离采用3-4天的乳鼠。你没有看到活的心肌细胞可能是:此时胎鼠心肌尚不成熟,胰酶消化使细胞损伤致死亡。也可能心肌细胞还未分化完全,还没表现出心肌细胞的特征。因为在膜片钳下,新生大鼠的心肌细胞电流特征和成熟大鼠的也存在很大差异。这也只是我个人的意见。你可以查查文献看,是否有这样做过的。也可以将胰酶浓度调低,看看是否有改善,至于到底需要多少浓度的胰酶,还是需要多做几次才行。这需要综合考虑胎鼠的胎龄和消化条件,不同的条件组合,结果都可能不同。