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标题:【讨论帖】心肌细胞培养互助

hyuu[使用道具]
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我是第一次作实验,请问家兔心肌细胞的分离方法?望各位高手指点,
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ero11[使用道具]
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如果不断加热水控制温度而影响了其它环节,那就两个人做,这样就能够忙得过来了,试验条件有限制,就只好这样克服一下了。
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ero11[使用道具]
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家兔心肌细胞分离的方法和豚鼠,大鼠的差不多。你可以参考一下下面这篇文献:Cultured adult cardiac myocytes: Future applications, culture methods,
morphological and electrophysiological properties. Cardiovascular Research. 1998; 39:280-300.
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am10[使用道具]
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各位同道,大家好!
粗略看了一下大家的帖子,似乎让我看到了希望。
我用同样的方法——胰酶与胶原酶等体积混合作为消化液,大鼠的乳鼠MC做出来细胞数目与纯度都比较理想,而小鼠的乳鼠MC培养却一直不理想——细胞生长状态欠佳,数目也少,无法融合成片形成同步节律。请教大家,小鼠乳鼠心肌细胞的培养是否要格外注意些什么细节问题么?谢谢!


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am10[使用道具]
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对不住,新手上路,图片竟被我弄成了这样,自己也吓了一跳。
图中的两个MC倒是都有搏动,可是这样的情形是无法进行下一步实验的。
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芙蓉宫主[使用道具]
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我做的是乳鼠心肌成纤维细胞的培养,刚开始做,一次作3~4只,接种在一个25cm的培养瓶中,用胰酶消化,贴壁30分钟后更换培养液,贴壁的细胞形态各异,三角形、圆形、梭形、扫帚形,量不是很大,细胞在培养后的5~7天就全部死掉,培养瓶又没污染,苦恼之极,请教各位高人,指点一二,多谢!
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请教在消化完放入培养瓶以后,需要2小时左右的差速贴壁分离杂细胞,可是到底是留下原培养瓶的细胞还是留下吸出液体中的细胞培养呢?到底哪个含有心肌?
我用怀孕母鼠的腹内胎鼠心脏进行消化取心肌,咱找各位常用的方法,但是没有看到活的心肌,胰酶的浓度没有问题,是因为胎龄太短了吗?
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eric930[使用道具]
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1, 差速贴壁法主要是把心肌细胞和成纤维细胞分离,以纯化心肌细胞。成纤维细胞贴壁速度比心肌细胞快很多,基本上静置1-2小时即贴壁,这时候,心肌细胞还没贴壁,这样就能把贴壁的成纤维细胞去除。因此,留再原培养瓶中的是成纤维细胞,即杂细胞,而吸出的液体中则是心肌细胞应留住。
2,你用孕鼠腹内的胎鼠分离心肌细胞,这个我没有做过。一般乳鼠分离采用3-4天的乳鼠。你没有看到活的心肌细胞可能是:此时胎鼠心肌尚不成熟,胰酶消化使细胞损伤致死亡。也可能心肌细胞还未分化完全,还没表现出心肌细胞的特征。因为在膜片钳下,新生大鼠的心肌细胞电流特征和成熟大鼠的也存在很大差异。这也只是我个人的意见。你可以查查文献看,是否有这样做过的。也可以将胰酶浓度调低,看看是否有改善,至于到底需要多少浓度的胰酶,还是需要多做几次才行。这需要综合考虑胎鼠的胎龄和消化条件,不同的条件组合,结果都可能不同。
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101010[使用道具]
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还有一个问题 我用的是10%的1640血清 用什么样的培养液好呢?
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dreaming[使用道具]
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希望我的方法可以给你帮助!我和你用同样的办法剪下心脏,放入Hank液中清洗三遍,然后在已灭菌的滤纸上吸干血及液体,剪下心房后,用Hank液再清洗三遍,放入另一干净灭菌小烧杯,剪碎,再用Hank液清洗三遍后,加入酶液转移至小培养瓶中进行消化,弃去首次消化液,收集后几次的消化悬液为细胞悬液,我认为这样操作所得的血细胞较少,换液后基本可除去。如果大家认为我的方法有不好的地方,也希望大家给我提出!
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