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《我在养乳兔的心肌细胞,我的方法是取乳兔心脏俩个,剪成小的组织块后,置入10ml 0.1%的胰酶中,消化10分钟,弃上清,再加入胰酶8ml,消化10分钟,自然沉淀1分钟后,取上清入另一离心管中,加入含血清的培养液终止消化,反复6-8次,将离心管中的上清1000转离心5分钟后,加入培养液,吹打后培养1-2小时,待成纤维细胞贴壁后,再将培养液倒入另一培养皿中,进行培养.也就是所谓的差速培养法.
问题是:培养2小时后,镜下观察未见有成纤维细胞贴壁,无法进行差速培养,结果三天后,贴壁的细胞全是成纤维细胞.请大家帮我分析以下原因!!!!!
谢谢!急,老板让我月底前培养出来,现在已经过了三分之一了!!!!救命! 》
给你提几个问题：
1、取出心脏后，是否用pbs液洗过。洗过后另外用一个小烧杯剪心脏
2、你的消化液和培养基先要复温。消化方式可以是轻轻吹打或是用磁力搅拌器，控制在记数17左右，第一次的不要，中间不用加培养液终止消化，反复5-6次，离心管里先加入一定的培养液其终止消化作用，取上清到离心管，离心，我们这里乳鼠心肌离心1000，10min，沉淀用培养液制备成悬液。
3、上述细胞悬液加入培养瓶中，放入培养箱，培养条件我们这里乳鼠是37度，5%co2。1h后就可以贴壁了。你需要的不是贴壁细胞，而是尚未贴壁的细胞，成纤维细胞贴壁速度比心肌细胞快，1h后，可以吸出尚未贴壁的细胞悬液，用mem培养液接种至培养瓶中。
