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标题:[分享帖]CCK8试验~。~菜鸟篇

nn255[使用道具]
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正在做,顶一下。

可是,
我的细胞在加药后所有的细胞都死了。晕!
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milkdog[使用道具]
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回复 #11 nn255 的帖子

什么药?效果这么好?
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吴才子[使用道具]
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回复 #11 nn255 的帖子

药物的浓度是不是太高了,药物的浓度梯度也要摸索的。还有做的过程中要防止发生污染。想问一下,您的药上细胞前是通过怎样的方式灭菌的?
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我的CCK-8的第二次试验结果:

背景:悬浮细胞,加入药物后培养24小时。

加入CCK-8后,颜色马上发生了改变。虽然CCK-8的说明书上推荐1-4小时检测,但是我的检测时间为20分钟后,结果在0.7-0.8左右。

在50分钟的时候,检测的结果在1.3-1.4左右。

请大家给提供点参考:是不是接种的细胞太多了?这次的CCK-8检测数据有效吗(那一次20或50分钟的数据比较好)?
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回复 #14 milkdog 的帖子

抱歉,没有培养过悬浮细胞。不敢冒然提议。能否先说一下全细胞的OD值是多少?数据是否有效,要看整块板的数据如何,20min、50min数据哪个更好你可以先算一下RSD。取RSD更小的为佳。
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milkdog[使用道具]
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非常感谢楼主的提示。

此次实验基本认为要失望了。总结做过的2次CCK-8实验经验,更准确的话说是失败经验如下:
1)CCK-8加法:沿侧壁加入,避免产生气泡。还有一个技巧是用1:1体积的培养基混匀后加入,这样起到减小加样误差。
2)CCK-8使用之前,先做个标准曲线。用不同的细胞数接种,然后加入CCK-8 1小时,2小时,3小时检测450nm 以OD值1.0--2.0为标准选择细胞数。
3)确认药物跟CCK-8不反应。在培养基中加入CCK-8,2-3小时后检测。以及在培养基中加入药物和CCK-8,2-3小时后检测。检测出来的OD值为空白对照,以不超过0.3为标准。
4)待续-
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milkdog[使用道具]
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抱歉,没有培养过悬浮细胞。不敢冒然提议。能否先说一下全细胞的OD值是多少?数据是否有效,要看整块板的数据如何,20min、50min数据哪个更好你可以先算一下RSD。取RSD更小的为佳。

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什么条件下测出来的是全细胞的OD值?
数据有效性如何判断?
RSD我理解了。
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回复 #16 milkdog 的帖子

我用词可能不当了,全细胞在这里我想表达的就是不加药物,只有细胞和培养基,加入CCK8后的值。气泡可以在检测时吹掉,还有就是加入以后要适当敲击底部,让CCK8混匀。
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吴才子[使用道具]
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什么条件下测出来的是全细胞的OD值?
数据有效性如何判断?
RSD我理解了。

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数据有效与否,其实说白了就是你自己想要的实验结果是怎样的,你的实验目的是什么。你做出的实验数据与你的预想是否符合。如果不符合,在你确定所有的操作无误的情况下,再去分析讨论实验结果产生的可能原因。比如说你配了一系列浓度的药物溶液,上了细胞后OD值与浓度梯度不符合,而你又确定实验操作无误,那可能的原因就是药物的溶解性问题等等。我这是打个比方,具体的还要看你的实验是怎样设计的。在不知道你的实验设计、药物性质前提下,你这样简单说数据如何,然后问数据是否有效,真的是爱莫能助。
我们这里能够讨论的也就是实验操作,对于数据的分析肯定是自己根据实验本身去分析考虑的。
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milkdog[使用道具]
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这个帖子开的非常适合我,我正在做这方面的实验。

最近做了一个5000,开始倍比递增的细胞生长曲线。
分别检测1,2,3,4小时的CCK-8 在450nm的OD值。

结果说明,细胞以2万的接种浓度比较适合,依据是此时OD值接近1.0。
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