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标题:[分享帖]CCK8试验~。~菜鸟篇

兔唇[使用道具]
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前辈好。我也有考虑过测之前换液,不过说明书上说酚红对检测不影响,就偷懒没有换。不过想请问换液是直接用吸管将废液吸走吗,要吸很干净吗?

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枪头吸会更干净些哦!操作熟练后基本可以控制每次的实验误差在10%或20%之内。
检测之前最好镜检,要相信自己看到的,而不是一味遵从比色数据。我就是因为每次镜检,才会发现很多显色液使用过程中的问题,再加以改进,直到理论数据与实际看到的相符。不要怀疑自己的能力,有时候只是细节方面没有做好罢了,我们一味照本宣科了,太迷信产品说明,没有做足预实验。
说下最近遇到的问题,也许会对一些人有些帮助。测活用的细胞株的药物敏感度是最重要但是也是很容易被忽视的问题。如果你不是用原代的话,商品化的细胞株有个很致命的问题就是细胞代次。测活用的细胞不能有所变异或者功能退化,这很致命,但这是不停的传代必然导致的问题。我一直坚持认为要用从ATCC购买的细胞,在小代数以内尽可能冻存尽量多的细胞。这回贪便宜在某院细胞所买了一株未知代数的细胞株(再具体就不说了,大家心里明白啊,呵呵),我花了大半年时间几乎没有任何实验结果,最后用干扰素一测,该细胞压根儿没有反应……崩溃了!挨了很多批评不说,自己的信心差点丢失了。现在又要花两个月的时间去买ATCC的细胞,真的很得不偿失的。说下ATCC的细胞价格,官网价格乘以18,就是人民币的价格,代理商么大陆就一个,我就不作宣传了,大家可以自己去查。最好走正规代理商,运输历时近两个月,小代万一出问题了,赔偿问题很纠结的。如果你的产品最后需要申报,细胞来源也需要证明,当然走正规渠道比较放心些。
我又废话多了……^_^
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milkdog[使用道具]
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细胞的问题也是一个大问题。
我做了几次CCK-8没有反应之后,也曾经想过细胞的问题。
偏偏这个细胞是我所不太熟悉的半悬浮细胞。
而且该细胞异型性明显。

文献所提供的照片与自己养的细胞照片不同,但是该文献与细胞建株最原始的照片中倍增时间明显也不同。所以不好判断。
而细胞建株的原始文献在上世纪70年代。原文也找不到了。

苦恼中。
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fei1226com[使用道具]
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想问个问题,你们用DMSO做药物溶剂吗?DMSO对细胞到底是有毒性的还是没毒性的?为什么我做出的结果不一样啊
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吴才子[使用道具]
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回复 #23 fei1226com 的帖子

有毒,而且毒性很大。要把终浓度控制在千分之一以内。
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rxcc33[使用道具]
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请教楼主,在铺96孔板时,每孔铺100μL或是200μL,根据什么来决定啊?
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rxcc33[使用道具]
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请教楼主啊,我师兄以前做的是MTT,我接着他做,但是我用CCK-8,你说的那些条件要不要重新摸过啊?
谢谢楼主解答!
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rxcc33[使用道具]
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楼主,我也在用CCK-8啊,请问体积200μL,那加CCK-8 10μL还是20μL?
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dotaaa[使用道具]
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谢谢楼主,顶一下
顺便说一些使用CCK-8的体会
我们用CCK-8检测细胞活性,每次读96孔板,都换液,无血清培养基+CCK-8,1:10,我们不用枪头吸,就是甩板,反复甩几下就OK了,每次读出的数据还是比较正常的,孔与孔之间的误差不大
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吴才子[使用道具]
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回复 #26 rxcc33 的帖子

不好意思啊,忙着做实验,好久没有上来看。
细胞数应该不用重新摸了。孵育时间要摸。100微升还是200微升体系要看自己实验设计,一般参照同类细胞其他文献资料。cck8的量也要看实验数据来定。量多显色就深,OD值就大。预实验肯定是要做足功夫的。浪费小小是必然的。
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吴才子[使用道具]
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回复 #28 dotaaa 的帖子

这样做应该还会节省CCK8,不过想请教下你们怎么进行甩板操作的。在超净台里吗?我用的抽真空吸管吸的,发现差异还是存在的。虽然理论上说细胞贴壁了就不会那么容易被吸走。
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