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标题:[分享帖]CCK8试验~。~菜鸟篇

rxcc33[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼主回复！
不过我对如何摸CCK8细胞浓度感到很疑惑！因为这有两个变量，细胞数和CCK8孵育时间
1、我可以铺很多细胞数，孵育时间很短，应该可以使OD值在1左右；
2、或者铺很少细胞，孵育时间加长，也可使OD值在1左右。
请楼住指教！
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发表于 2011-12-19 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #31 rxcc33 的帖子

我想你应该是还没有做过这个实验。你不能迷信数据，你要清楚你的细胞何时贴壁，何时为对数生长期，你的药物作用在细胞的什么期。你当然可以种很多细胞数，可是你加药还要孵育那么长时间，细胞堆积生长的话，你的数据一样不好。
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rxcc33[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼主回复！
那你说的摸细胞浓度的预实验到底怎么做呢？
我不明白应该具体怎么做啊，谢谢楼主赐教啊！
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这样做应该还会节省CCK8，不过想请教下你们怎么进行甩板操作的。在超净台里吗？我用的抽真空吸管吸的，发现差异还是存在的。虽然理论上说细胞贴壁了就不会那么容易被吸走。
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是呀，这样会节省CCK-8。
我们就是在超净台里甩板的。就是把板子翻过来甩几下就OK了。
我们的真空吸液器是得一个孔一个孔吸，我们是整板操作嘛，比较麻烦，而且吸液时间长，细胞容易干死，呵呵，个人看法。
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吴才子[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #33 rxcc33 的帖子

你对你的细胞了解吗？你知道细胞贴壁要多长时间吗？
你实验总共是多长时间？在这个时间里你的细胞在孔里能长多满？
其实你师兄做过MTT，我个人觉得是不用再摸细胞数的。
还有MTT或者CCK8只是个试剂盒而已，如果你没有必要换，你大可以继续做MTT，这样可以省去很多走弯路的时间，大把的实验要做呢，别在这个评价手段上纠结浪费宝贵的时间。
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吴才子[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #35 zhezhe 的帖子

想象不出是怎么甩的，你们是不是在旁边放了个废液缸，然后把废液甩在里面。不然很难想象你们是把废液甩在哪里的。我们的真空洗液器也是一孔一孔吸，不过我的手法还不熟练，还是会有细胞损失。
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主厉害，是我没说明白，我们就是那么做的，我们就是用96孔板的塑料外壳当做废液缸的，然后把废液甩在里面。
用真空吸液器一孔一孔吸，是不是也是一孔一孔加还是用排枪加CCK-8那？那样会用很长时间吗？
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吴才子[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:29 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #38 zhezhe 的帖子

塑料外壳，嗯，不错，我要试试。就是怕会污染。
对，吸的时候是一孔孔吸。加的时候用的是排枪。速度倒是还可以，就是我发现还是有细胞损失。
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #39 吴才子 的帖子

楼主试试吧，我们一直用这种方法，没有污染过。
我个人认为，甩板没有真空吸液器的力量大，所以细胞损失可能小一点。楼主比较一下吧，有什么问题在交流。
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