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标题:[分享帖]CCK8试验~。~菜鸟篇

阿敏[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问一下，大家做cck8，得到的数据如何处理的？

我是做药物对细胞的毒性试验，想绘制细胞毒性曲线图，做了6个复孔，数据应该怎样处理呢？有软件可用吗，如何处理？谢谢！
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vvmmoy[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
先马克一下先，准备要做了，正在吸收些经验。我的细胞是种板贴壁后进行转染，再以药物处理24，48，以及72h，做一个药物与CCK8之间有无作用的试验还是必要的哦？
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dongdongqiang[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
顶下楼主 。
补充一点 如果药物与CCK-8有反应，可以在药物孵育后 吸出药物，加入培养基轻轻洗1-2遍 ，然后弃去，加入混匀好的110ul培养基和CCK-8（个人经过几次试验后认为这样可以减少加样误差），其余步骤和普通的一样就行了。我也是失败了好几次，才对CCK-8有了认识的，希望对大家有帮助。
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伊莎贝拉[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做的是药物浓度对细胞的影响，做MTT，做了3次，浓度越大OD值越小。但是，后来我做2次CCK8后发现，浓度越大OD值越大，怎么回事呢？大家给分析下，郁闷。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
有毒，而且毒性很大。要把终浓度控制在千分之一以内。

==============================

我看的是1%，请问你这个数据的依据？
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吴才子[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #55 铜雀 的帖子

我看的是1%，请问你这个数据的依据？

==========================================================================
eg：
以HepG2、MTT-assay、dimethyl sulfoxide为key words。在PubMed中任意寻找一篇相关英文文献。You will find a word just like :"... in 1% dimethyl sulfoxide (DMSO). " 但是注意这里的是配制浓度，我们这里所讲的是终浓度，也就是最后在细胞板中药物的终浓度，你要算上药物被细胞悬液等稀释的倍数。

不同细胞对DMSO的反应不一样，最好的办法是自己设置对照，观察DMSO对细胞的影响。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #56 吴才子 的帖子

哦。谢谢。似是而非的了解了。我现在用DMSO溶解我的刺激药物。配制为10mg/ml的药物原液。使用时再稀释1000倍使用。不知道还有影响不？我做的CCK8
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吴才子[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:58 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #57 铜雀 的帖子

不是似是而非，也不是答非所问。方法都教给你了，查阅文献，在此基础上预试验要做。授人以鱼不如授之以渔。
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831226[使用道具]
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发表于 2011-12-19 15:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个帖子开的非常适合我，我正在做这方面的实验。

最近做了一个5000，开始倍比递增的细胞生长曲线。
分别检测1，2，3，4小时的CCK-8 在450nm的OD值。

结果说明，细胞以2万的接种浓度比较适合，依据是此时OD值接近1.0。

============================================================================

前辈 你好你们总结的太好，收益很多。刚刚开始做原代细胞做细胞毒实验。买的也是同仁的cck8 请问
1,细胞以2万的接种浓度比较适合 时间是在什么时候合适呢?
2,细胞生长曲线咋么做的呢
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bohe221[使用道具]
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发表于 2011-12-19 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢楼主的分享。马上也要开始做了这方面的实验了，老师要求用CCK-8法，正在大量的查文献的阶段。
希望预实验能够成功。
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