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标题:[分享帖]CCK8试验~。~菜鸟篇

yysr238[使用道具]
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哎 我也正在做CCK-8测化疗药物干预24小时后原代白血病细胞的OD值,4h后用酶标仪检测发现未加化疗药的比加了化疗药的孔OD值还低,数据中最高的也只有0.4,不知道怎么回事 已经做了5次,有2,3次都这样的。找原因一直没找到,求助中...
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吴才子[使用道具]
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回复 #61 yysr238 的帖子

有没有观察过细胞的状态?细胞没有种均匀?
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yysr238[使用道具]
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回复 #62 吴才子 的帖子

谢谢您的回复,我的悬浮细胞在显微镜下看的都还可以,我在怀疑是不是酶标仪没测正确,明天再侧一批看看
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tianmei001[使用道具]
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同问,我最近CCK8 的数据和预想的居然相反, 请教楼主:
细胞怎么种植均匀啊?
我是每次把细胞吸到一个大概5ml的EP管里,然后每孔加90ul细胞,加10ul药物,10ul CCK8,不知这样合理不?
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吴才子[使用道具]
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回复 #64 tianmei001 的帖子

反复吹打均匀。细节决定成败。
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回复 #5 吴才子 的帖子

你好,我是做细胞毒性实验,请问加药和加CCK8时的培养基是不含血清的吗?
我做的毒性实验,加药和不加药对细胞影响不大诶。。。。药物浓度比文献上的高出3倍效果也不好,抑制率不高,最多27%。。。怎么办。。。
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amyjetsci[使用道具]
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实验注意事项 CCK-8实验注意事项

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)        KTC011001       
Abbkine CCK-8试剂盒检测非常便捷。CCK-8试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。
品牌(规格)        Abbkine        Sigma        Dojindo
100次        200 元        703.17 元        350 元
500次        640 元        2779.92 元        890 元
2000次        2050 元        13899.6 元(3000次)        ——
10000次        7180 元        ——        8380 元

实验注意事项:
建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
白细胞可能需要培养较长时间。
当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

艾美捷科技公司 http://www.amyjet.com/
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amyjetsci[使用道具]
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实验注意事项 CCK-8实验注意事项

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)        KTC011001       
Abbkine CCK-8试剂盒检测非常便捷。CCK-8试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,无须再进行任何配制等操作 。无须使用同位素,所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞,不必收集细胞,也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。
品牌(规格)        Abbkine        Sigma        Dojindo
100次        200 元        703.17 元        350 元
500次        640 元        2779.92 元        890 元
2000次        2050 元        13899.6 元(3000次)        ——
10000次        7180 元        ——        8380 元

实验注意事项:
建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK-8试剂后的培养时间。
有条件的情况下建议采用多通道移液器,可以减少平行孔间的差异。加入CCK-8试剂时,建议斜贴着培养板壁加,不要插到培养基页面下加,容易产生气泡,会干扰OD值读数。
白细胞可能需要培养较长时间。
当使用标准96孔板时,贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低,因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验,请先计算每孔相应的接种量,并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。
如果没有450nm的滤光片,可以使用吸光度在430-490 nm之间的滤光片,但是450nm滤光片的检测灵敏度最高。
如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。

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nanxun[使用道具]
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回复 #63 yysr238 的帖子

请问你后面cck8的问题怎么解决的
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