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[求助]我做了个细胞的流式（Annexin-PI）检测细胞的凋亡
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这个是我今年做的Annixin V-PI双染检测细胞凋亡，该图为其中的一个 结果，我看试剂说明书以及到网上找信息觉得这个图总是有些问题，按照理论，左下象限是活细胞，右下象限是早期凋亡细胞，右上象限是晚期凋亡细胞，左上象限看见资料说是系统调节用的。按照理论的话左上象限应该细胞不会很多的对吧？可是我的所有的图左上象限的细胞都这么多，我不知道问题在哪里，希望哪位流式大侠高手可以帮我解决下，感激不尽！
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最新回复
wmp1234 (2012-3-23 13:41:04)
你做的是不是贴壁细胞？
PI＋基本上都可以认为是死细胞。而从你的AV强度来看，总感觉没有完全染上去。
nn255 (2012-3-23 13:41:37)
PI＋基本上都可以认为是死细胞。而从你的AV强度来看，总感觉没有完全染上去。
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你好，感谢高手给出宝贵意见。
我做的是悬浮细胞，低血清12h后处理72h染色后的图片。是没有染上去吗？我很迷茫··· ···
dog002 (2012-3-23 13:42:31)
1.补偿没有调好
2.PI染得时间太长
nn255 (2012-3-23 13:43:21)
dog002 (2012-3-23 13:43:49)
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看你用的是什么机器了，有没有事后补偿？但是结果也不会太好，因为电压调不了只能调补偿。另外我建议你PI下次上机的时候加，最好是加一个上一个，因为PI染色很快，时间久了假阳性高。
nn255 (2012-3-23 13:44:17)
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PI在说明书上说的是染色10分钟，我染色了10min钟后洗了，但是还要打的去上机的地方，然后换成他所需要的管子，那以后是不是我就到了那里之后PI染色10min钟后洗掉再上机？多谢提出宝贵意见。
66小飞侠 (2012-3-23 13:53:13)
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可怜的孩子，你把PI带上带了那里加上上机就行，不用洗。哪个公司的试剂盒？
nn255 (2012-3-23 13:53:40)
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是碧云天的试剂盒，Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒，哦，对了，是加了PI后避光打的去的，然后上机。那应该是PI染色时间太长了对不？我以后把加PI染色那一步放到上机的地方做就可以了对不？多谢高手啊！一下感觉明朗许多，多谢了！！！高手！
66小飞侠 (2012-3-23 13:54:07)
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呵呵，我也不是什么高手，只是做的比较多一些，反正你可以加一个上一个，碧云天的我没用过，我用过BD，invitrogen，bender，凯基等，都可以这么做，你下次试试。
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