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[求助]Percoll 分离细胞

字体: 小 中 大 | 打印 发表于: 2012-3-26 16:51    作者: mimili_901    来源: 分析测试百科网

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[求助]Percoll 分离细胞



文献报道50%Percoll 水平离心机10000转 40分钟后细胞可以分层，这样就可以把细胞分离开，自己尝试数次都没有成功。（Percoll 没有问题）
百思不得其解，哪位做过这方面试验，麻烦指教，不胜感激！
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  • 2541 (2012-3-26 16:52:07)


    同意楼上的。。。。10000转。。。即使有Percoll也太高了，细胞不全碎了？

  • mimili_901 (2012-3-26 16:52:29)


    感谢楼上两位参与讨论。
    我参考的是外文文献上的方法。
    Percoll分离细胞分为连续梯度和不连续梯度两种。
    连续梯度就是先配置成50%浓度，10000转离心，40分钟后percoll就会自动分层（自上而下）。细胞也会停留在各层。
    不连续梯度法是先配好不同浓度，依次叠加于管中，然后加上细胞，3000转离心，细胞就会停留在不同浓度层面。
    希望大家继续参与讨论，赐教！！

  • 一叶 (2012-3-26 16:52:47)


    没有对连续梯度或不连续梯度产生疑问，而是离心力。。。。一般来说，没有percoll存在下，1000rpm以上细胞就很难保持完整了，超过2000rpm，细胞还不都碎了？即使percoll有一定保护作用，但是10000rpm？这个时候离心力是多少了？用的什么离心机？

  • woshituzhu (2012-3-26 16:53:09)


    为什么细胞培养的书上写的培养间充质干细胞的时候用1500rpm离心啊？那不是离死了~

  • woshituzhu (2012-3-26 16:54:48)

    请问一下各位高手，用Percoll分离法得到的小鼠肝脏单个核细胞是否含有淋巴细胞和DC细胞？得到的单个核细胞细胞又需要怎么培养？非常感谢！！

  • 一叶 (2012-3-26 16:55:41)


    活细胞应该好些，转速高点问题不大，Fix的细胞更脆弱些，但是我还是觉得10000rpm实在是太高了。。。。

  • loli (2012-3-26 16:55:58)


    我们离心;400g,30min, 2:3分离液：血液。

  • mimili_901 (2012-3-26 16:56:20)

    我用的是beckman超速离心机，水平转头JA-10，跟文献上报道的一样。
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