[求助]原代脐静脉内皮细胞冻存

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• DDD (2012-4-03 16:39:43)

  
  冻存培养基可以采用：培养用培养基+10% DMSO，既常规保种培养基的配方；
  最好采用：M199（高糖）+20% FBS + 10% DMSO，在冻存前需要确定有无支原体污染，如果是自己分的原代细胞，还需要做八因子的鉴定。确定冻存时的活率超过95%。

• ritou1985 (2012-4-03 16:40:03)

  
  请问你是自己养的人脐静脉内皮细胞吗?用的什么培养基,加生长因子了吗?什么样的血清?我养了好几个月了,但是现在细胞活性不好,一传代细胞就会变形.

• taoshengyijiu (2012-4-03 16:41:27)

  
  买的ECM培养基，成品就已经有生长因子和血清了，所以什么都没加。

• taoshengyijiu (2012-4-03 16:42:30)

  
  我的细胞是买的，也用的是ECM培养基，所以只是做了支原体鉴定。其它完全可以按照ECM相关的说明书进行就可以，现在很好。

• taoshengyijiu (2012-4-03 16:45:16)

  
  培养基价格是：1600RMB吧，
  八因子鉴定的抗体各家都不一样，一般用1：100-500是没有问题的。我采用1：300（博士德），信号挺好的。
  如果你还是无法解决细胞培养的问题，可以PM我。我有质量好，经过鉴定的HUVEC买，买来后就可以直接使用。可以PM我。

• gemei0115 (2012-4-03 16:45:37)

  
  你的细胞不是买的吗？怎么还需要鉴定啊？你买的细胞多少钱啊，哪个公司的？是原代培养第一代冻存的，还是细胞株？如果是细胞株是第几代的？

• taoshengyijiu (2012-4-03 16:46:19)

  
  我现在主要是自己分的，只是在做特殊验证试验的时候才买。我现在复苏分装的这只都用了快一年了。

• S6044 (2012-4-03 16:46:53)

  
  菜鸟求助：请问 我的课题是血管内皮细胞中的一种蛋白和细胞凋亡的关系，文献上用的是脐带脐静脉分离的HUVEC，我想问问如果我不是自己分，而是购买HUVEC细胞株，对我的试验有影响吗？