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[求助]肝星状细胞 胰酶消化浓度及时间
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我现在一直养的是肝星状细胞，消化的时候都是用的0.25%的胰酶，但是消化的太快了，第一次消化的时候待了不到半分钟细胞就全掉下来了，导致我倒胰酶的时候把细胞也都倒掉了，为此挨了老板一顿训。
这次我消化的时候是加上胰酶之后接着倒掉，然后用剩下的胰酶消化的，没半分钟，细胞还是都大片的滑落了，虽然这次没有丢细胞，但是我感觉细胞状态不是很好。我自己觉得是消化时间太长的缘故吧。
请问各位 你们消化的时候用的胰酶的浓度是多少？这种状态不好的细胞还可以好转吗？谢谢哈
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最新回复
zhezhe (2012-4-05 11:50:49)
消化过度会死掉一些细胞，不过应该不影响剩下的细胞生长。
cocacola (2012-4-05 11:51:51)
QUOTE:
谢谢哈 但是我的细胞就是死的比长得快 本来还很多 一消化最后剩下慢慢的就死了mimili_901 (2012-4-05 11:52:28)
你养的星状细胞 是人的还是鼠的？原代的还是买的细胞株？买的话，从哪买的，质量如何?谢谢！
cocacola (2012-4-05 11:54:42)
QUOTE:
是人的，买的是细胞株，在湘雅买的，700快钱一瓶加50邮费，质量还可以啊
我们上次买了一瓶 后续自己冻存了20管 但是被一个缺德鬼在液氮罐拿出来没放进去 所有全死了 现在又在湘雅买的 细胞还没到呢 估计三天后就到了
mimili_901 (2012-4-05 11:58:21)
我们上次买了一瓶 后续自己冻存了20管 但是被一个缺德鬼在液氮罐拿出来没放进去 所有全死了 现在又在湘雅买的 细胞还没到呢 估计三天后就到了
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谢谢！
呵呵，这个便宜！我之前问了几家，都要1200左右...
恩，这样的话，可以问湘雅买了，再谢，
mimili_901 (2012-4-05 11:58:43)
我发现文献上 有用M199的 有1640的 DMEM的 都有 呵呵
还有 我是上海这边的 不知从湖南运过来 会不会有啥问题
dotaaa (2012-4-05 11:59:15)
这次我消化的时候是加上胰酶之后接着倒掉，然后用剩下的胰酶消化的，没半分钟，细胞还是都大片的滑落了，虽然这次没有丢细胞，但是我感觉细胞状态不是很好。我自己觉得是消化时间太长的缘故吧。
请问各位 你们消化的时候用的胰酶的浓度是多少？这种状态不好的细胞还可以好转吗？谢谢哈
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加胰酶前先给瓶子里加点HANGK'S液，基本按2:1吧，把胰酶浓度降到0.1%左右，同时降低胰酶绝对用量，原来如果加1ml现在改成0.3-0.5ml，过度消化对细胞伤害很大的，基本就这啥。
cocacola (2012-4-05 11:59:39)
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对 我的细胞就是全给消化过了 越长越少 长得不如死的多
dotaaa (2012-4-05 12:00:53)
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消化伤了的话要多加点血清，里面的蛋白可以帮助细胞修复细胞膜损伤，但伤心至死的除外。
cocacola (2012-4-05 12:01:16)
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哈哈 恩 我的血清都是直接加在DMEM里边配好的 10% ，当时也懒得在重新给血清解冻了，唉 我可怜的细胞可能还真有一部分是伤心至死的
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