[求助]我的细胞是不是被污染了？

最新回复

• eric930 (2012-4-05 12:04:05)

  
  会不会是增长太快？营养消耗过多所以培养液变成全黄色？

• 莲花白 (2012-4-05 12:04:24)

  多谢，细胞死的时候我看细胞也不是特别多。本来计划是今天晚上传。是不是换液要每24小时换一次啊。

• 莲花白 (2012-4-05 12:04:51)

  
  是不是细胞被污染后，本来已经贴壁的细胞还是贴的，不会悬浮啊。我的细胞我只用生理盐水洗了一遍，再次观察时发现培养瓶里已经没有细胞了。多谢谢老兄！！

• 社会主义好 (2012-4-05 12:05:14)

  应该是污染了，找找污染源吧。PBS、胰酶，培养基，血清？或是你自己操作有问题。找到了再做实验。

• toy (2012-4-05 12:05:31)

  
  最好做一个细胞生长曲线，这样可以掌握细胞每个阶段的的生长状态，及时传代或是换液。这种情况也可能是细胞密度太大，被“饿死”了

• owanaka (2012-4-05 12:05:56)

  我是养细胞新手。3号晚上六点传代的细胞（乳腺癌MCF-7），4号晚上十点看，贴壁的很好，5号中午就全死了。培养液为DMEM，细胞死后培养液颜色变成全黄色，而且细胞全都悬浮，培养液有白色沉淀。是不是细胞被污染了啊。请教各位。***！！！
  
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  应该不是污染，如果是污染，4号中午可能就是混汤了。
  
  基本可以判断是你传代细胞浓度太高，细胞甁用的多大的？培养液是多少ml？细胞数过吗？加了多少细胞？是凭感觉还是凭经验？
  
  这个细胞非常好养，俺们学生新进实验室练手的传统细胞之一。

• 莲花白 (2012-4-05 12:06:25)

  
  多谢各位！
  特别谢谢楼上，因为我的细胞中午2点拿回来的时候人家给我用的是25ml的培养皿，加了3ml培养液。我回去是晚上6点，用的是125ml的玻璃培养瓶传了，加了有9ml培养液。是不是太少了。应该至少加30ml左右？！
  当时细胞死后培养液里的白色沉淀像那种自来水烧开后水里的沉淀。看起来也是有点混。有没有可能是污染啊。
  ***！！！！

• 莲花白 (2012-4-05 12:06:56)

  谢谢各位。
  我昨天细胞死后，换液后培养瓶中没有细胞了。我把培养基继续培养到今天晚上，培养基又变成全黄色了，而且和之前的表现一样，也有沉淀。是不是确定存在污染的情况啊。我跟新鲜培养基对比，好像变黄的培养基中有好多很小的黑点，250倍镜下好像在动。是不是叫什么“黑胶虫”啊！
  谢谢各位，求解！

• whitesheep (2012-4-05 12:07:24)

  
  培养基变黄，而且浑浊，显微镜下（甚至肉眼下）有细细的像泥沙样的东西，晃动的时侯会流动，应该是细菌污染吧。我碰到好多次了，我是做原代的，去了组织块第二天或者第三天看到培养基这个样子心就凉了，扔了不知道多少瓶了。

• vivian4123 (2012-4-05 12:07:44)

  
  培养基要是变得特别黄，而且有些浑浊的样子的话，就要考虑是不是污染了。我开始养细胞的时候，不知道为什么，细胞总是长得很快，所以每次第二天看的时候，培养基都是很黄的。但是代谢太快导致的黄不如污染的黄明显，而且培养基不是那么浑浊。听师姐说，有的时候如果污染在第一天通常可能看不出来。但是如果污染了的话，再传代就可能加重污染。

• TAT (2012-4-05 12:08:28)

  
  我也遇到过一模一样的情况，亲身经历。确实是污染了，我当时也很纳闷为什么培养到第三天才表现如此明显，第二天看起来还凑合的。至于是什么污染，我们老板没让深究，就让我全换了进口的现成的培养液，拿最原始的细胞复苏，后来就一直很好了。那阵子过去后我有重新复苏那一批，照旧是第二天偶见沙状，第三天细胞液变很黄，上层不混，底下一层白色，一摇就混了，细胞却还有正常贴壁生长的。
  建议扔掉吧，无力回天了，否则只会加重污染啊。

• 莲花白 (2012-4-05 12:08:56)

  
  我就用原来的培养瓶换新鲜培养基，两天后又黄了。所以我也认为是污染了。因为已经没有细胞了，谈不上是细胞长的太快把培养基消耗了。
  心痛啊，已经扔了，希望下次可以顺利。谢谢各位。
  祝各位养细胞的群友都顺利。