[求助]HEPG2 MTT

最新回复

• utt0989 (2012-4-09 19:23:40)

  我也做的是锯齿状，但是我们老板说重做！

• xingyi08 (2012-4-09 19:24:04)

  养的HEPG2细胞做MTT实验 所用药物是我们科室自己的药 别人的文献在μmmol/l浓度梯度下做出来阳性结果 随着时间和浓度抑制率是增加的 而我做了几次 结果都是波动的 不管是时间轴还是浓度轴 都不是正比关系 如果做成增殖抑制曲线 就是一个锯齿状 而且不同波长扫描结果得出的抑制率波动也很大 我把结果给老板看 老板居然说可以 叫我接着做 但是 我还是比较担心 请大侠指点一二 （实验方法和细胞应该没有问题 仔细和实验室的师兄师姐核对了多次 难道是我的统计水平有问题 ？）
  非常感谢
  
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  具体说说，你的试验各步步骤吧，有时间俺爬上来帮你看看。
  
  你先把细胞数降点，有可能培养液的营养成为另1个限制因素，必须排除。

• Ao7 (2012-4-09 19:24:35)

  前一天下午消化细胞计数铺板 每个孔5000个细胞100μL 用排枪 空白孔100μL培基
  第二天上午配药 每个孔加100μL含药培基 空白孔和阴性对照孔加100μL培基
  干预时间6 12 24 48 72小时 加入20μLMTT 4小时后加入150μLDMSO
  手动摇晃一会 上机检测 570/630
  细胞数量过多的问题我想过 但是阴性对照孔的OD值随着时间是增加的 这样就可以证明细胞数是OK的吧 至少证明培基是可以支撑细胞生长的
  我没有看过这种折线结果的文献 请继续指点

• xingyi08 (2012-4-09 19:25:00)

  前一天下午消化细胞计数铺板 每个孔5000个细胞100μL 用排枪 空白孔100μL培基
  第二天上午配药 每个孔加100μL含药培基 空白孔和阴性对照孔加100μL培基
  干预时间6 12 24 48 72小时 加入20μLMTT 4小时后加入150μLDMSO
  手动摇晃一会 上机检测 570/630
  细胞数量过多的问题我想过 但是阴性对照孔的OD值随着时间是增加的 这样就可以证明细胞数是OK的吧 至少证明培基是可以支撑细胞生长的
  我没有看过这种折线结果的文献 请继续指点
  结果的图像就是附件所示
  
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  那张图连个图注、说明都没有。看不明白。
  
  【细胞数量过多的问题我想过 但是阴性对照孔的OD值随着时间是增加的 这样就可以证明细胞数是OK的吧 至少证明培基是可以支撑细胞生长的 】这个说法也不一定，6和12小时的可能不会有影响，24小时后的，就不一定啦，你那个最高浓度的100μL里药液和培养液是多少：多少？你的药物还能在浓缩10-100倍吗？

• Ao7 (2012-4-09 19:25:21)

  那张图 纵坐标是抑制率% 横坐标是不同的浓度 浓度梯度设定为2倍增长的 这张是6小时时间点的图图
  几乎每个时间点的结果都是这样的 折线图
  
  最高浓度的100μL里药液和培养液是 1.936μL药物，98.064μL培养基
  药物本身是液体的 不能浓缩了
  
  谢谢

• junhun (2012-4-09 19:26:17)

  
  我的实验和你类似 你分组的时候 几个组

• dragonkilly (2012-4-09 19:26:35)

  实验组 阴性对照 空白对照 阳性对照

• junhun (2012-4-09 19:27:01)

  请问LS再加DMSO之前你是用什么样的方法去掉上清液的 ；排枪 还是滤纸

• Ao7 (2012-4-09 19:27:35)

  
  1ML注射器轻轻抽吸

• junhun (2012-4-09 19:27:58)

  
  谢谢 我今晚做的结果 也是没太有规律 估计做出来也是锯齿状

• Ao7 (2012-4-09 19:28:34)

  
  最新消息 选一个时间点 把浓度梯度拉大为10倍 看看结果如何 待续

• eric930 (2012-4-09 19:28:57)

  
  可以试一下，把96孔板倒扣在滤纸上，充分吸干MTT和培养液，然后加DMSO,振荡器上摇10分钟（震荡不均匀会对吸光度影响很大，在试验中也会遇到这种情况），然后再测一下，good luck