[求助]MTT，加入DMSO之后的颜色

最新回复

• caihong (2012-4-09 19:33:00)

  QUOTE:

  原帖由 bs4665 于 2012-4-9 19:32 发表 bbcodeurl('http://bbs.antpedia.com/images/common/back.gif', '')
  
  
  
  请教各位大侠，我做的是细胞增殖实验，为什么加入DMSO之后是紫红色？加入MTT孵育4小时后，孔底看见团块状的紫（黑色）色？有些孔有，有一些孔没有沉淀，加入DMSO之后未溶解
  请问：加入MTT之后的沉淀是什么样子的？加入DMSO之后应该是什 ...

  加入后泛黄

• bs4665 (2012-4-09 19:33:28)

  刚加入时基本泛淡黄色。
  
  完全溶解后，颜色由紫黑到蛋黄按细胞代谢产生的甲那啥的量的多少分布。

• qhyu (2012-4-09 19:34:06)

  
  我们用无血清培养基稀释的MTT溶液，整个颜色是浅橙红色，慢慢的会变淡，可以看到下面蓝紫色的结晶，结晶有点像小冰晶那样，加DMSO后变明显的紫色，也许下面深上面浅，再慢慢摇匀就可以测OD了。

• nn255 (2012-4-09 19:34:41)

  
  也就是说紫色也是正常的？但是为什么检测那个老师说，如果是紫色，那就不应该用490的波长测OD，说是颜色不对？

• 3648755 (2012-4-09 19:35:11)

  也就是说紫色也是正常的？但是为什么检测那个老师说，如果是紫色，那就不应该用490的波长测OD，说是颜色不对？
  
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  紫色本来就是正常的颜色呀，你的结晶是蓝紫色，溶解后显紫色怎么不正常呀？

• nn255 (2012-4-09 19:35:34)

  可是为什么老师说用490的波长不对呢？
  不好意思，我想再问一下，上次490nm测得调零孔OD为0.015-0.017，标本中最大的OD值0.127，大部分都是在0.020-0.025，请问这个有意义吗？应该怎样看OD的值有没有意义啊？

• duoduo (2012-4-09 19:36:11)

  
  OD值一般在0.1至0.9之间更接近其线性范围！加入MTT之后培养皿底部形成的是紫色沉淀，加入DMSO后将沉淀溶解，也是紫色的，我们一般在570nm测OD！个人感觉你测得的OD值有点太低了，不在其标准曲线的线性范围内，你可以通过多接种一些细胞或者溶解沉淀时少加一些DMSO来解决OD值太低的问题

• duoduo (2012-4-09 19:36:34)

  你测量的OD值太低了，和空白对照都差不多了，估计你的细胞很少，或者你加的DMSO太多了

• bs4665 (2012-4-09 19:36:58)

  请问DMSO 不都是吸去培养基后直接加150UL吗？这个量的多少和OD值有关系吗？而调零孔也只有0.015而已耶！头疼！！

• duoduo (2012-4-09 19:37:25)

  
  我觉得有关系，DMSO加的量多，那么溶解后的颜色就会浅一些，加的量少颜色就会深一些！当然这只是我个人的观点

• DNA (2012-4-09 19:39:03)

  同样与你的MMT品牌有关，我有过次经历，换了MTT，颜色，空白值均会有很大差别，建议还是用sigma的。是比较贵。再者，你的MTT有没有大量失效啊？

• bs4665 (2012-4-09 19:39:53)

  头疼，应该不会失效吧，别人分装后存在-20度的，应该也是sigma的，我们实验室没有酶标仪，每弄一次，都要去找别人，郁闷，这样老没结果，崩溃了

• duoduo (2012-4-09 19:40:25)

  做实验都是这个样子！让人崩溃

• bs4665 (2012-4-09 19:40:44)

  最新数据更新：
  
  第一板：调零孔 0.252-0.264，余下数值0.259-0.446(72h)
  第二板：调零孔 0.110-0.206，余下数值0.178-0.317(24h),请问，有意义吗？是不是第二板做的不对啊？为什么数据好像差挺多的？
  在数据统计的时候，这个值是不是还需要减去调零孔德数值啊？这样的话就更小了吖

• milkdog (2012-4-09 19:41:33)

  你的空白孔值太大了，我的空白孔一般只有0.07，或者更低，不知道为什么你的空白孔这么大的值，计算结果的时候就是实验组的测量值减去你空白孔的均值！复孔间差异大，证明的96孔板铺的不均匀，最好铺的均匀点

• milkdog (2012-4-09 19:41:56)

  
  DMSO需要室温避光保存，做MTT我用的都是国产的DMSO，进口的只用来动存细胞，溶解试剂之类的