[求助]关于细胞传代

最新回复

• TAT (2012-4-11 16:09:13)

  
  换液最好。不换也行。

• bananapeople (2012-4-11 16:09:33)

  
  不需要的

• summerxx (2012-4-11 16:12:11)

  
  要看细胞的生长状态和培养基的情况而定，我也是这样传代，但是隔2－－3天换液一次，我培养的是血管平滑肌细胞

• one (2012-4-11 16:13:59)

  
  没有绝对的，因为每个细胞的生物学特性均不很相通，有些细胞对胰蛋白酶不是很敏感，也就是胰蛋白酶对这种细胞的贴壁影响不会很大，但是胰蛋白酶毕竟对细胞的生长还是有一定影响的，所以呢，换液肯定更好！

• october7 (2012-4-11 16:14:24)

  
  我培养的是骨瘤细胞，传代之后都是隔两天换的液，没有什么问题。

• remenb (2012-4-11 16:15:27)

  要看细胞的生长状态和培养基的情况而定，我也是这样传代，但是隔2－－3天换液一次，我培养的是血管平滑肌细胞
  
  我养的也是平滑肌细胞,看过你写的取材方法,我用的和你一样,只是长出来两次都被我传代传死了,这一次估计又快不行了,我每次养得 都是只有一部分组织块爬出细胞,看周围很密了然后就传代,过两天细胞就没有了或者是一簇一簇的,其他的地方并没有长满,不知如何处理.希望你能指点一下,非常感谢.我用胰酶传代.

• zranqi_1 (2012-4-11 16:15:54)

  
  我养的肺癌细胞，我传代之后第二天都没有换液，细胞也挺好的，当然换液是最好的！

• nn255 (2012-4-11 16:16:33)

  
  我养的是小鼠胰岛beta TC-3,加胰酶后刷洗一下，用移液管吸走胰酶，然后再加入培养基吹打，分装。细胞状态不错。本身离心也是一种损伤。呵呵，不过，吸胰酶要在细胞未脱落时，要不细胞会损失。

• xevin (2012-4-11 16:17:20)

  
  没有一定。要看细胞的状态。可以在显微镜下观察一下。
  我的程序一般是：首先吸走老的培养液，PBS洗两下，加入胰酶后，放入37℃培养几分钟（~2-3分钟吧），然后加入新培养液，上下吸几遍使细胞均匀。然后分装。第二天，显微镜看一下细胞的状态。不好的话，就换一遍培养基。不过我一般都不换。
  只所以换培养液是因为部分代谢物有毒性，不利于细胞生长。

• qqq111 (2012-4-11 16:17:53)

  
  我现在也开始养beta-TC细胞，所以想请教一下您关于怎样才能养好？因为似乎长得特别慢 ，成团长的，容易死掉？上次就把细胞弄死掉了，好像是因为换液传代不及时，我用的是DMEM/10%FCS,请指教指教哦

• wu11998866 (2012-4-11 16:18:37)

  
  用胰酶加EDTA消化细胞后,说必须离心去除EDTA,因为它对细胞的贴壁有影响,不过实际是不是这样,我还没试过

• 8964357 (2012-4-11 16:19:05)

  
  换不换液主要得看细胞情况：
  1. 不同的细胞传代后情况不尽相同，有些对消化液非常敏感，有些不容易贴壁等等。
  2. 一般情况下用不着传代第二天换液，因为对贴壁细胞而言，贴壁后对细胞的影响越小，其生长越顺利，换液等等均会引起细胞培养环境的改变，多少会影响其生长。但液不是绝对的。如果传代第二天，死细胞较多，或者培养液颜色改变明显，或者培养液浑浊等等均会影响细胞正常生长。
  3. 还有根据细胞的培养液，考虑换液。

• bohe221 (2012-4-11 16:19:31)

  
  我 在 传代的 观察完细胞在 显微镜下 的 表现，，感觉很好，在酒精灯附近放置一会，结果 细胞全部消失不见，质只留下黑色的 痕迹，请教，这是我 第一次传代 啊，如此失败，郁闷啊

• bohe221 (2012-4-11 16:20:25)

  
  回复楼上的：不知你传代是消化了多长时间，根据我做的经验，一般是消化时间很关键，如果过长，很可能细胞会被消化死。而且消化后的细胞不要再室温放置太久。你可以试着改进一下时间问题。

• zhezhe (2012-4-11 16:21:48)

  
  最近在养间充质干细胞，用胰酶处理，发现消化作用并不好，即使是消化时间延长到5min，之后又用移液管吹了n多次，大多数细胞还是黏在瓶底，下不来，所以觉得说不同细胞，真是不能一概而论，前两天试用了一下刮刀，感觉细胞下来比较干净，现在等着看状态了。但是，以前之用胰酶处理时，除了说细胞消化下来的较少少，传代后生长慢了点之外，状态还是好滴。

• 33号 (2012-4-11 16:22:05)

  
  终于找到消化效果不好的原因了，迟到的幸福，但是还是学到了：胰酶的消化前，如果用生理盐水，或PBS洗得充分点，及把握好消化温度（37度）真的很重要