[求助]我的细胞怎么老是漂起来啊

字体: 小中大 | 打印发表于: 2012-4-12 14:19 作者: lixi559 来源: 分析测试百科网

我养的是CHO/DHFR-细胞，买过来的时候很清爽，可怎么自己养着养着细胞就漂起来了啊，特别是密集的地方，让我们实验室专门做细胞培养的老师帮忙养，她说也有这种情况出现，我现在都穿了四五次了还是有出现这种情况，大概有10%左右，用的是进口的GIBCO血清，今天问了下细胞库，他们说他们用的是德国进口的BIOCHROM血清,想问下这跟血清有关吗？还是别的什么原因，请教高人啊！发愁。。。

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utt0989 (2012-4-12 14:24:21)

1.建议每次传代都冻存一些细胞，因为到后面传代次数越多，可能就越容易出现这种情况，而不得不重新购买细胞；可能是传代次数多造成的
2.血清：可能是原因，可以试试其他的血清，或者询问他人是用什么血清养
3.胰酶消化过度：可能消化过度对细胞造成比较大的损伤，导致传代状态不佳
4.细胞长的太密！
bananapeople (2012-4-12 14:24:46)

在细胞密集的地方，新生细胞没有办法找到贴壁点，细胞当然会飘起来。同时一些老化了的细胞贴壁能力有所下降，容易被竞争去贴壁的行列，从而飘起来。所以建议你传代的时候把细胞吹散均匀，不要有抱团的。
另外就是及时传代，并不是细胞长满才传代，当有个别地方长的过于密集，容易叠加的时候应该就要传代了。
kulee (2012-4-12 14:25:07)

1、胰酶消化不要过度，再减弱些
2、吹打均匀，不要有成团，这和消化程度和吹打次数与力度都有关

这2个是关键。

有好结果告诉我下。
leifengta (2012-4-12 14:25:28)

以前我80%-90%才传代，这样会太密集吗？今天我又试了下，细胞长到70%我就传了，胰酶的浓度我是配成0.08%，以前消化是放培养箱2min，今天试了下放1min，我明天去看看结果，谢谢大家的意见。
one (2012-4-12 14:25:50)

敢问朋友你使用孔板呢还是培养瓶呢?
one (2012-4-12 14:26:50)

培养基的PH是一个很关键的标准，你的培养基颜色没问题吧
33号 (2012-4-12 14:27:10)

我是用T25的培养瓶养的，后来试过用6孔板用，结果都一样，培养基没问题吧，新买的，试过现配现用，都还是有细胞漂起来
okhaha (2012-4-12 14:27:33)

细胞一般长到70%~80%最健康，适合传代。我养的个别细胞系50%就传了。
pengke1983 (2012-4-12 14:27:57)

大家帮忙看看我的细胞，上次说换了血清养之后，情况稍稍好转，可区别还不是很显著，消化时间已经改为1min了，实在没招了，大家帮我想想办法，多谢啦！
pengke1983 (2012-4-12 14:28:22)

这是我昨天刚给细胞拍的照片，传代后第三天

58643400.snap.jpg
cj_mondy (2012-4-12 14:28:40)

细胞传代时铺瓶不均匀，导致部分地方细胞生长过密
mimili_901 (2012-4-12 14:29:00)

你用什么培养基，DMEM么？如果是的话，改用DMEM-F12试一下。

做个支原体检测吧！
summerxx (2012-4-12 14:29:24)

我用的是IMDM，是不是我碳酸氢钠没加的原因呢？我看我买细胞的那个网站上说要加的，然后我看IMDM液体的配方里面有了，所以没加，大家说说，碳酸氢钠没加细胞会漂起来吗？是不是会影响酸碱度的原因？