[求助]MTT法 吸光度值偏小

最新回复

• 00无名指00 (2012-4-12 15:06:37)

  
  加DMSO前，MTT是否吸出？

• kuaizige (2012-4-12 15:06:59)

  
  怎么MTT的浓度是5mg/L？应该是5mg/ml吧？再说MTT的量96孔板的话，应该加10%左右的MTT，差不多20微升。

• am10 (2012-4-12 15:07:54)

  是5mg/ml,96孔板的话,加20微升

• zhenxin (2012-4-12 15:08:21)

  前两天有个MTT总结的帖子 看了后很受启发 LZ可以下下来看看啊

• woshituzhu (2012-4-12 15:08:45)

  
  我们用的是4mg/ml，96孔加20ul
  4h测。还有，你细胞是不是很少？

• pencil菲 (2012-4-12 15:09:29)

  
  加MTT前，好像不需要把培养基吸掉吧！直接加入MTT即可。

• gemei0115 (2012-4-12 15:11:11)

  
  直接加入MTT。加入MTT后，有两种处理方法：1，洗掉上清，加入DMSO100ul/well,摇床上摇几分钟即可上机检测。 或者，2，直接加入 2* 三联剂， 50ul/well，37度过夜后上机检测。 我们一直这么做的

• 131415 (2012-4-12 15:11:34)

  
  楼主，建议你把培养基吸掉再加MTT，而且你去测一下你溶解MTT的PBS或者平衡盐溶液的PH如果是偏酸的话那么出来的OD值就会这样，不管你加多少MTT量都一样，缓冲液的HP值会影响最后的OD值的。

• idea2011 (2012-4-12 15:12:07)

  
  MTT值偏小是因为细胞少，加MTT前在镜下先大概看一下细胞，有没有，有多少，加完DMSO后再看一下颜色，如果细胞少的话，颜色也会很浅，我们用570nm，比较灵敏！

• tieshazhang (2012-4-12 15:12:26)

  原代培养的大鼠小脑颗粒神经元，接种密度7.5万，在培养1d后加药，加药1d和7d后测定?
  疑问：
  1 “接种密度7.5万”如何让计数，单位是什么？
  2 小脑颗粒神经元是贴壁细胞吗？如果是的话，1h细胞还没有贴壁，此时就进行药物处理的话，细胞会死亡比较严重，可以等细胞贴壁后在药物处理。
  空白对照OD值是多少？如果也很小的话，就是你细胞密度太低了。
  或者是因为你的是神经细胞，虽然细胞数目少，但是等细胞贴壁就基本上满了。你可以先在24或更大孔板里面进行前处理，等MTT处理完毕，用DMSO溶解掉甲瓒后转移至96孔板检测。注意转移充分。