[求助]大家看看我这张内皮细胞染色

最新回复

• u234 (2012-4-12 15:16:04)

  为什么是假阳性啊？不懂
  
  但是做染色，起码要做2点：
  1、你的目的是鉴定细胞纯度的，那么应该拍一张明场和一张荧光，在同一视野下看，这样才知道有多少细胞是内皮。
  
  2、做免疫荧光，一定要做对照。阴性对照就是用PBS做一抗。

• pengke1983 (2012-4-12 15:17:10)

  为什么是假阳性啊？不懂
  
  但是做染色，起码要做2点：
  1、你的目的是鉴定细胞纯度的，那么应该拍一张明场和一张荧光，在同一视野下看，这样才知道有多少细胞是内皮。
  
  2、做免疫荧光，一定要做对照。阴性对照就是用PBS做一抗。
  
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  因为我也染了别的孔，有的在镜下看上去根本不是内皮细胞的形态，结果居然也染上了~
  第一次做，忘了做阴性对照了，汗~~
  谢谢你的建议，我准备近期再做一次~~
  不知道假阳性和一抗的浓度有关系吗？我用的是1：100的……

• is2011 (2012-4-12 15:17:30)

  
  如果你在细胞固定上固定不好的话，可能会应影响形态的。
  
  我也发现做免疫荧光的细胞和平时相差下面看的不一样。你用的什么固定剂？
  
  我最近也在为这事儿纠结呢，我打算另发帖子提问。我的问题和你相反，荧光弱弱的，还老是掉片

• pengke1983 (2012-4-12 15:19:24)

  如果你在细胞固定上固定不好的话，可能会应影响形态的。
  
  我也发现做免疫荧光的细胞和平时相差下面看的不一样。你用的什么固定剂？
  
  我最近也在为这事儿纠结呢，我打算另发帖子提问。我的问题和你相反，荧光弱弱的，还老是掉片
  
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  我就用的4%多聚甲醛，用triton打孔并且用BSA封闭了。
  我做得着急，细胞贴壁没过6个小时我就固定了，我想是不是这个原因？看上去有的不是那种内皮细胞的形态了。
  你的荧光弱，打孔了吗？掉片的话，是不是玻片没有包被啊~~
  我是提前把玻片用明胶包被的~~

• pengke1983 (2012-4-12 15:20:46)

  
  你那是低倍吧？我看形态还好啊
  
  我的是用0.2%明胶包被的，而且长到24小时以上，看着不少才拿出来做的。
  
  但我发现细胞在玻片上就是长的不如塑料上的：当塑料上都长汇合的时候，玻片上还稀稀拉拉的。而且掉片，不是在第一步。细胞固定以后都会掉，有2次发生在二抗后的洗涤时。我加液体已经相当小心了。

• is2011 (2012-4-12 15:22:41)

  我都是用1%的明胶包被，虽然镜下看的时候背景有点脏~~~
  要不你试试包被的明胶浓度提高一点呢？

• pengke1983 (2012-4-12 15:27:26)

  楼上的，欢迎到我的问题集中营来交流！
  
  cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=16423673&sty=1&tpg=1&age=0')

• kswl870 (2012-4-12 15:28:23)

  
  你已经做到这一步了啊，羡慕啊！
  我也养内皮细胞，没用生长因子和明胶，一开始细胞还多，后来反而是细胞越来越少了，汗，⊙﹏⊙b
  生长因子和明胶是必备的吗？
  请赐教~

• pengke1983 (2012-4-12 15:29:25)

  
  生长因子是的。我要是不用的话每次就长十几个，然后逐步衰败，，，
  
  明胶倒不一定，我用塑料皿也能长。用了会更好些吧