[求助]做家兔尿道上皮细胞培养

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【求助】我做家兔尿道上皮细胞培养,根据文献,尝试过两种方法进行取材和分离,但是结果都不理想,请大家相助。

【我的方法1】
动物麻醉后,用剪刀剪取0.5×0.3cm大小的组织块,粘膜下注水的方式分离粘膜上皮与上皮下层,因为此时组织块较薄,容易卷在一起,再用2.4u/ml的dispaseⅡ37℃消化后,组织较薄,再加上黏黏呼呼的消化液,很难将上皮与上皮下层分离开来。

【我的方法2】
粘膜下不注水,将所剪的组织块用眼科剪尽可能去除粘膜下组织,再用2.4u/ml的dispaseⅡ37℃消化2h,在消化液里或者D-hanks液中分离上皮很难完整的分开上皮层。

【我的结果】

⑴所得的上皮细胞数量较少

⑵成纤维细胞多,纯度低,

【我的问题】

① 如何在dispase消化后,肉眼观察下,完整分离上皮与上皮下层,得到纯度较高的上皮细胞。
②粘膜下注水是否适用于分离尿道上皮层。

【搜索情况】

园中没有搜索到关于兔子尿道上皮细胞培养的相关帖子

本人试验已经进行半年了,这个问题一直困扰着我,止步不前,焦虑万分,针对以上问题特向园中这方面高手请教,盼望指点一二,感激不尽!!!
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最新回复

  • cj_mondy (2012-4-13 13:33:09)

    QUOTE:

    原帖由 hustwb 于 2012-4-13 13:32 发表


    【求助】我做家兔尿道上皮细胞培养,根据文献,尝试过两种方法进行取材和分离,但是结果都不理想,请大家相助。

    【我的方法1】
    动物麻醉后,用剪刀剪取0.5×0.3cm大小的组织块,粘膜下注水的方式分离粘膜上皮与上皮下层,因 ...
    这种取材我没有做过,但我做过小肠上皮细胞的提取,方法是:

    剖杀动物后,取十二指肠段,然后用眼科剪剪开小肠,用冰冷NS冲洗肠粘膜,再用干净的盖玻片刮取肠粘膜,然后对粘膜进行后续处理,方法供参考。
  • is2011 (2012-4-13 13:33:40)


    取材后,用2块载玻片的毛玻璃面轻轻研磨,过1会加几mlHank's液冲洗1下,反复几次9行,最后剩下个结缔组织块1扔。
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