[求助]刚到手的冻存细胞株该如何处理？

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• kewanqi2011 (2012-4-16 10:57:57)

  收到冷冻管细胞的处理方式
  
  1. 收到细胞株包裹时，请检查细胞株冷冻管是否有解冻情形， 若有请立即通知。细胞株请尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于–70℃，隔夜后，移到液氮)。
  
  2. 冷冻细胞解冻程序:
  2.1. 依据细胞株数据单指定基础培养基种类、血清种类和其它指定成份和比例制备培养基。绝大多数细胞均无法立即适应不同基础培养基或不同血清种类，若因实验需要，必须有所不同时，务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需之实验。
  2.2. FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。
  2.3. 将培养基置于37℃ 水槽中回温，回温后喷以70% 酒精并擦拭之， 移入无菌操作台内。
  取出冷冻管，立即放入37℃ 水槽中快速解冻， 水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿， 否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化后， 以70 % ethanol 擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台内。
  2.4. 依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10 ml 培养基加至T25 或T75 flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25 或T75 flask 内之培养基，混合均匀，放入37℃，5 % CO2 培养箱培养。
  2.5. 对绝大多数细胞而言，1% 以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO 敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO 者， 则可将解冻后之细胞悬浮液放入5 - 10 ml 培养基中，离心300 ×g (约1000 rpm)，5分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37℃，5% CO2 培养箱培养。
  
  收到T25 flask细胞的处理方式
  于寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask 均加满培养基。
  1.  检查flask 外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。
  2.  将原封之T25 flask 静置于37℃， 5% CO2 培养箱中，使细胞回温至37℃，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。
  3.  隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基，(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml 培养基于flask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘， 则将细胞做传代培养。

• 66+77 (2012-4-16 10:58:55)

  
  谢谢，我因为培养基是三种混合的，现在还却缺一种，可不可以收到冻存的细胞株后直接放在-80℃的冰箱中呢？

• ha111 (2012-4-16 10:59:33)

  
  如果是以干冰冷冻过来的，可以直接进-80度冰箱或者液氮；如果是以液体形式过来的，即养好的细胞放培养瓶里，并且是加满培养基的，则吸走培基将细胞经过消化重新接种培养。一般你要买的公司都会给相关的说明书。

• 8princess8 (2012-4-16 10:59:56)

  
  国外买来的细胞株，是邮寄给你的？还是有人帮你带回的

• Ao7 (2012-4-16 11:00:26)

  国外买来的会带有说明书，按照说明做一般没啥问题。如果是国内哪家公司帮你买的，送过来会告诉你怎么处理。

• 00无名指00 (2012-4-16 11:00:52)

  请问你的细胞是从ATCC买的吗？具体的购买途径是怎样啊，我们实验室想买，不知道在哪买啊~谢谢啦~~

• chuntian1983 (2012-4-16 11:01:40)

  
  可以找sigma，这个公司代理大陆的ATCC业务。

• baidukk (2012-4-16 11:13:54)

  我的是从ECACC买的，sigma公司代购的