[求助]多次复苏培养MR2均失败，求助各位可能的原因

最新回复

• duoduo (2012-4-18 15:52:36)

  
  这个估计是冻就没有冻好的原因，不赖你。
  
  换纯血清复苏试试吧，找个好的，例如海克隆的胎牛血清。待复苏细胞800转2到3分钟离心、轻取全部上清，加入2毫升好血清轻吹、放入8孔板培养，12-24小时观察、细胞开始生长后可补含10%牛血清的1640培养基。

• qumm1985 (2012-4-18 15:52:54)

  谢谢。
  复苏细胞800r，2-3分钟。感觉不能离下来，会丢失好多细胞？

• duoduo (2012-4-18 15:53:18)

  谢谢。
  复苏细胞800r，2-3分钟。感觉不能离下来，会丢失好多细胞？
  
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  嗯，sigm的台式肯定不行（要2000RPM），我用的是大1点的水平转子的离心机。复苏细胞离心，尽量不要用到较高的转速。

• ending (2012-4-18 15:53:56)

  
  可以试试HYCLON的血清，不用灭活，如果养细胞不用于免疫学实验，血清是不用灭活的，复苏细胞的时候可以试一下不离心，直接在37度溶解（最好在1分钟之内）之后，直接放到培养瓶培养，然后12时后再换液，要是还不活，就是细胞的原因了。

• qumm1985 (2012-4-18 15:54:19)

  可以试试HYCLON的血清，不用灭活，如果养细胞不用于免疫学实验，血清是不用灭活的，复苏细胞的时候可以试一下不离心，直接在37度溶解（最好在1分钟之内）之后，直接放到培养瓶培养，然后12时后再换液，要是还不活，就是细胞的原因了。
  
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  恩，谢谢。
  因为前期师姐养细胞的时候用了不灭活的血清，细胞一直没养起来。后改用灭活血清，才有好转。现在就一直沿用师姐的方法，采用灭活血清。
  细胞复苏离心和不离心我都已经尝试了，效果没有显著变化，还是没有成功。

• 2541 (2012-4-18 15:55:30)

  
  我们1640+10%的胎牛血清的也是复苏之后一直长不好，后来增加了血清浓度。一切OK啦。增加到15%。。。。

• qumm1985 (2012-4-18 15:55:54)

  我们1640+10%的胎牛血清的也是复苏之后一直长不好，后来增加了血清浓度。一切OK啦。增加到15%。。。。
  
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  谢谢
  关于血清浓度，我也调整过。从15%到8%之间，都试用过，效果不理想。血清，国产四季青和进口海克隆都用过。1640培养基自己配置和买的液体分装都用了。
  想着是不是该调的都调整过了，细胞只是长不起来。。。

• moonlight45 (2012-4-18 15:56:17)

  
  血清浓度用20%，最好是进口胎牛血清。不要频繁换培养基，其实换液要少量多次，比如1/4量或1/3量。

• qumm1985 (2012-4-18 15:56:43)

  十分感谢。
  少量多次换液的理由是什么啊？我还一直想的是尽量少机械刺激新复苏的细胞。虽然四分之一换液不用离心，但多次这样动细胞我总觉得是不是对细胞生长也不是很好？还有四分之一换是怎么换？直接把换掉的扔掉？盼答复.

• bananapeople (2012-4-18 15:57:33)

  
  楼主：
  建议你再次增加培养基血清浓度到20%至25%。每次8ml左右换液（刚铺满培养瓶底部为好），每天换一次液，以不停刺激该细胞生长。
  还有你需要注意该细胞的生长有没有需要特殊的温湿度以及co2浓度等。
  如果还是不行的话建议你更换细胞了。可能是该细胞冻存过程中出问题了。

• fei1226com (2012-4-18 15:57:57)

  
  你换液的时间太长了吧，我们一般半小时后换液，