[求助]caco-2细胞培养条件

最新回复

• wsll (2012-4-20 12:22:59)

  高糖DMEM培养基

• caihong (2012-4-20 12:23:23)

  
  我的细胞状态也不好,细胞第一天连成片没形态,好象是长满了,等有形态的时候吧已经长的很满了,所以总是不知道该什么时候传代

• xue258 (2012-4-20 12:23:49)

  
  用DMEM试下吧,我们实验室是用的这个培养基

• 911 (2012-4-20 12:24:14)

  我去年从上海细胞库买回来是也是按照他们标示用的1640,后来换成高糖DMEM，一直养到现在，没有问题，这种癌细胞还是非常好养的！
  传代最好不要等它长的太满传，大概80-90%就可以传了，太满再传后反而状态不好了。

• tieshazhang (2012-4-20 12:24:43)

  请问现在还在养这个细胞吗？我的细胞这几次都是传代或者复苏之后第二天有不少贴壁生长的，可是换液后反而又全死了，请问你知道这是为什么吗？还有细胞总是传代后中间扎堆边缘很少贴壁长，有什么解决方法吗？非常感谢指教！

• lixi559 (2012-4-20 12:25:10)

  我的情况和你正好相反，总是瓶的边缘扎堆生长，中间很少，尤其传的密度小的时候更是这样，上次传的密度小了到现在都不怎么长，上面飘很多黄色团块，看起来很脏，不知道怎样改善，麻烦大家帮个忙，谢谢！

• 阿敏 (2012-4-20 12:25:44)

  
  有武汉的群友吗，我复苏的caco-2细胞总是死掉，不知谁能发发善心给俺一瓶啊

• hyuu (2012-4-20 12:26:12)

  请问现在还在养这个细胞吗？我的细胞这几次都是传代或者复苏之后第二天有不少贴壁生长的，可是换液后反而又全死了，请问你知道这是为什么吗？还有细胞总是传代后中间扎堆边缘很少贴壁长，有什么解决方法吗？非常感谢指教！
  
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  我还在养caco-2
  换液后又死掉，我还没有遇到过这样的问题，扎推生长，长不开的话，我建议你增加营养，不知道你用的是哪种血清，我一直强调，Caco-2好养，但一定要保证它的营养足够，唉，用进口好血清吧。

• qqq111 (2012-4-20 12:26:30)

  
  我养的Caco-2在RPMI1640里比用DMEM长得好一点，但是在10倍镜下（目镜也是10X）看着挺好，在20X下看着细胞内有许多颗粒。透明度不是很好，不知道为什么。

• qqq111 (2012-4-20 12:26:57)

  
  我的细胞也是边缘先长满，中间稍微慢一点。

• gemei0115 (2012-4-20 12:27:25)

  
  我想问下，大家用得非必须氨基酸是液体还是粉剂啊，我们用的Sigma液体的那个上面写着是MEM非必须氨基酸，可是我们用得是DMEM培养基，请问这个有影响吗

• leifengta (2012-4-20 12:27:50)

  我们可是养的Caco-2细胞都是用高糖DMEM（内含内含10%的胎牛血清,1%非必须氨基酸,1%谷氨酸和青霉素-链霉素双抗液）！消化液是0.25%的胰酶--0.02%EDTA。

• woshituzhu (2012-4-20 12:28:16)

  
  caco-2（人结肠癌上皮细胞）：将Caco-2 细胞培养于高葡萄糖的DMEM培养基中( 1%非必需氨基酸, L-谷氨酰胺（L-glutamine), 培养液含青霉素（ penicillin）10,000U/ml-链霉素（streptomycin）10,000ug/ml, 10%胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS)）,长于T-75组织培养曲颈瓶中,通入5%CO2(相对湿度90%),置37℃培养箱中培养。培养介质2～3天更换一次,当细胞达到90%融合后，以不含钙,镁离子的磷酸盐缓冲液(PBS)清洗后与胰酶(0.25%)—EDTA(1mM)于37℃一起孵育至分离(约5～10分钟)。吹打细胞使之脱落，置离心管中1000rmp离心5分钟。细胞重新悬浮于完全DMEM液中以1:3的比例分配至新培养瓶中。即完成传代。

• 969 (2012-4-20 12:29:15)

  
  我现在遇到一个很棘手的问题：前几天从中科院购买了Caco-2细胞，15号到的，她们用的是F.NEM培养基,加20%的FBS,我16号换过一次液,先用EDTA-2Na浸润，再用PBS清洗，胰酶消化，原培养基终止……最后还把原培养基（她们是装满培养液快递过来的，其它CELL长的都不错）离心后加进去的，17号早上去看，还是漂浮了一层！18号我传了一次（一传一），今天早上去看，长的还是很稀，现在该怎么处理？请大家赐教！
  

• pencil菲 (2012-4-20 12:29:49)

  
  我原来养细胞时这样消化的：
  
  1 PBS洗3次，
  2 加入0.25%胰蛋白酶-0.02% EDTA消化，镜下观察至细胞变圆，弃去消化液，放培养箱数分钟，拍打瓶壁细胞脱落时取出，
  3 加入完全培养基吹打，离心，1 000rpm*5min，弃上清，加入完全培养基混匀后分瓶。
  希望对你有所帮助！

• cj_mondy (2012-4-20 12:30:33)

  请问：楼上的，在中科院买的细胞有什么区别？好养吗？我也想买，不过，好像有两种：一种450，一种1000？哪一种好啊？

• KGZ564 (2012-4-20 12:31:24)

  
  他们说便宜的是原来的，贵的是又从ATCC引进的，不知道差别有多大，大家有用过这两种不同价位细胞的战友过来讨论下吧!

• KGZ564 (2012-4-20 12:32:01)

  
  这个可能是胰酶消化过了吧，能缓的过来吧

• yhz1973 (2012-4-20 12:32:48)

  Caco-2细胞用什么样的培养基比较好？！可以邮寄吗？！

• jujuba (2012-4-20 12:33:17)

  
  1.高糖DMEM+10%FBS培养，3-4天传代
  2.Caco-2细胞贴壁慢，细胞第一天往往没有形态，2天后开始变成块状，3天连成片
  3.这个细胞消化有点慢0.25%TRY+0.02%EDTA，消化后离心去掉EDTA，EDTA影响细胞贴壁。
  4.细胞一传三到四没有问题。