使用胶做western blot的方法

在经典的Western Blot的世界里，蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣，构成WB完整过程，就象砌积木一样，少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友，告诉我，你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时，有没有设想过能省略掉其中的某个费时的…
在经典的Western Blot的世界里，蛋白电泳—转膜—封闭—抗体—显色这个五步骤环环相扣，构成WB完整过程，就象砌积木一样，少了前面一步的基础后面的就砌不上去。但是亲爱的朋友，告诉我，你们在一次又一次重复这个貌似简单又颇为费时的实验时，有没有设想过能省略掉其中的某个费时的非必需步骤，更直接更快得到结果呢？那该有多么省事啊！

真的有这样一种产品，抽掉了WB中费时的非必需步骤——转膜和封闭，直接在PAGE电泳胶上做免疫印迹！这个几乎颠覆传统WesternBlot概念的技术创新，完美演绎了“没有做不到，只有想不到”这一句话。

经过PAGE电泳分离的蛋白样本可以在凝胶里直接固定和染色（比如考马斯亮蓝）看结果，但如果要检测蛋白质特异性就要借助传统Western Blot的转膜的步骤，然后在膜上进行免疫反应检测。仿佛是天经地义似的。可是你有没有想过为什么一定要转膜？很简单：因为凝胶上的蛋白质会发生扩散迁移，需要“固定”，但是“固定”本身会影响蛋白质和抗体的免疫识别反应，所以需要将经过PAGE电泳分开的样本从电泳胶上共同转移到稳定的固相支持介质——膜上，使之不能再迁移同时又能保持免疫原性，然后在这个PAGE胶的“影像”也就是印迹上，可以通过免疫检测目标蛋白的特异性。这个方法借助转膜克服了一些难题，但是转膜本身也带来另一些问题：比如转膜的不完全性——样本中各种蛋白的大小和荷电各不相同，在电场中离开PAGE胶迁移速度、与膜的结合能力各有差异，导致转膜效率潜在差别；比如PAGE胶孔径和膜的孔径甚至电流的大小都会影响转膜效率——非常偶然遇上转移效率低的蛋白比如Fibrinogen纤维蛋白原，简直气昏人。再加上转膜过程也有可能造成部分蛋白免疫原性的丢失——特别是非变性胶，目标蛋白的部分抗原表位可能会发生变化，导致抗体无法识别检测。再加上转膜后膜上的其他空白位点需要进行封闭，以及膜本身对部分检测方法的不兼容和背景问题，可见费精力又费钱的转膜这个PAGE的“印迹”有时未必能很好的代表PAGE胶结果本身（这是非常特殊的情况。多数情况还是很好的，不要误会）。

这般辛辛苦苦的转膜印迹为的就是避过在凝胶上固定和保持蛋白免疫原性之间的矛盾，如果有办法可以在PAGE胶上能固定蛋白同时又能保持蛋白免疫原性，不就可以直接在PAGE胶上检测蛋白特异性，又避免前面这许多麻烦了吗？还大大节约时间和经费呢。且看生物通为你推荐的2种技术创新的产品——正是这貌似简单的创新，突破了原来的墨守成规，令未来的WB更加简单。原来只要我们敢于突破自己原有的框框，就会有更多精彩的发现！

一、Pierce公司：UnBlot In-Gel Chemiluminescent Detection Kit